fluorescence : voir au-deça de la limite de diffusion ?

[Jean-Luc P]

Salut,
j'aimerais avoir vos lumières sur un bref article dans le dernier Nature http://www.nature.com/nature/journal...l/440879a.html :

Envoyé par Nature

Biological imaging: The diffraction barrier broken

Garth J. Simpson1
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Abstract

The conventional optical limitations of fluorescence microscopy have been defied, to achieve nanoscale resolution of individual vesicle organelles at the junctions of neuronal cells.

Traditional optical microscopy cannot easily distinguish objects separated by less than about half the wavelength of visible light. For example, measurements of two fluorescent particles closer together than this 'diffraction barrier' generally produce one indistinct, bright blob. In practice, this equates to a maximum resolution corresponding to distances of around 200 nm for biological imaging using visible light. However, Stefan Hell and colleagues have developed a technique that overcomes the diffraction barrier and can resolve objects separated by less than about 40 nm (refs 1,2,3). On page 935 of this issue, Jahn, Hell and colleagues4 use the technique to provide the first in vitro images of the movements of single neuronal vesicles — the membrane-bound, bubble-like organelles that mediate communication between neurons. Their images help to settle a question that has been exercising cell biologists for some time.

The latest approach uses stimulated emission depletion (STED) microscopy1, 2, 3, a technique that relies on the overlap of two light beams in the focal region. The first beam excites molecules just as in traditional fluorescence microscopy — as the molecule absorbs the energy from the light, it is promoted up to a higher energetic state, and as it relaxes back to the ground state, it releases the energy in the form of light. The second beam, at a different wavelength, suppresses this fluorescence by 'stimulated emission', in which molecules are actively pumped down out of the excited state by light (in essence, absorption driven backwards). In sufficiently intense optical fields, stimulated emission becomes more efficient than fluorescence and is the dominant effect, drastically reducing the fluorescence.

Le principe du laser d'extinction de fluorescence, c'est bien qu'il fait de l'émission stimulée comme dans un LASER ?

[santantonio]

T'as tout compris.

De plus les deux faisceux lasers sont limités par la diffraction, mais un réglage subtil de l'intensité permet de réaliser une zone fluorescente plus petite que la limite imposée par la diffraction.

[Jean-Luc P]

Merci à toi.

[Chain_reaction]

Envoyé par santantonio

T'as tout compris.

De plus les deux faisceux lasers sont limités par la diffraction, mais un réglage subtil de l'intensité permet de réaliser une zone fluorescente plus petite que la limite imposée par la diffraction.

est ce que vous pouvez etre explicite! svp
je ne comprends pas:
1- diffraction
2- zone fluorescente

[Jean-Luc P]

Quel est ton niveau ?
(Histoire de composer une réponse qui te soit intelligible...)

La zone fluorescente est la zone dans l'échantillon éclairée par le laser qui permet de voir la fluorescence des molécules qui y sont présentes. C'est là où on peut y voir quelquechose et pas ailleurs car :
- au-delà de l'anneau les molécules ne sont pas excitées
- dans l'anneau autour de la zone centrale les molécules ne sont pas dans un état physique qui leur permet d'émettre des photons de fluorescence.