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quantification des ARN

  1. sacharybalka

    Date d'inscription
    février 2007
    Localisation
    Londres
    Âge
    33
    Messages
    117

    Question quantification des ARN

    Bonjour, esc-ce que quelqu'un pourrait m'aider? J'ai extrait l'ARN total du sol et je voudrais le doser pour savoir ce que ça a donné (c'est la première fois que j'utilise ce kit, et je connais personne qui l'aurait déjà fait). Il paraît que lire l'absorbance n'est pas très fiable et j'ai peur de contaminer mes échantillons. Que me conseillez-vous?
    Merci d'avance

    -----

     


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  2. fafac

    Date d'inscription
    janvier 2007
    Âge
    33
    Messages
    44

    Re : quantification des ARN

    Salut
    moi je dose les ARN sur des extraits cellulaires et j'utilise l'absorbance...
    Surtout que le rapport 260/280 te donne la pureté de tes échantillons.
    Par ailleurs je voi pas pourquoi tu les contaminerais si tu fait ca proprement.
    bon dosage
     

  3. sacharybalka

    Date d'inscription
    février 2007
    Localisation
    Londres
    Âge
    33
    Messages
    117

    Re : quantification des ARN

    merci beaucoup pour cette réponse, en fait ce qui me préoccupait, c'est des RNAses, tout le labo fait une paranoïa dessus. Mais finalement je vais doser un aliquot dilué, c'est tout. J'espère en avoir assez
     

  4. piwi

    Date d'inscription
    janvier 2005
    Localisation
    Strasbourg
    Âge
    40
    Messages
    7 852

    Re : quantification des ARN

    tu peux (et tu devrais) faire migrer un aliquote de tes ARNs sur gel. Ca te donnera une idée de leur état.

    Cordialement,
    piwi
     

  5. sacharybalka

    Date d'inscription
    février 2007
    Localisation
    Londres
    Âge
    33
    Messages
    117

    Re : quantification des ARN

    Le problème c'est que je n'ai pas de DEPC (commande en cours) et notre autoclave est en panne! je ne peux pas faire de gel RNAse free! Est-ce que mon ARN va être tout dégradé? sinon je l'ai dosé en spectro, dans de l'eau DEPC, mais mes rapports 260/280 sont trés bas, vers 1,4. J'ai lu sur le net que le DEPC pouvait influencer ces valeurs, mais aussi d'autres posts que pas. Qu'est-ce que ça voudrait dire?
    je comprends plus rien moi, c'est dur la recherche quand il faut tout prevoir tout seul! (je suis en M1) Mes commandes ne sont pas encore toutes arrivées et le stage avance inexorablement...
     


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  6. piwi

    Date d'inscription
    janvier 2005
    Localisation
    Strasbourg
    Âge
    40
    Messages
    7 852

    Re : quantification des ARN

    Pour le gel ne t'inquietes pas. Tu peux le faire sans DEPC. Nous au labo on a abandonné le DEPC. Si tu travailles proprement c'est inutile.

    Pour le dosage cela dépend de ta méthode d'extraction. Normalement, pour une extraction au trizol on devrait avoir un rendement compris entre 1.6 et 1.8. Si tu utilises cette methode, alors le chiffre de 1.4 me semble suspect. Peut être as-tu une contamination génomique? J'ai pas d'infos sur le DEPC et la valeur du dosage.

    Cordialement,
    piwi
     

  7. sacharybalka

    Date d'inscription
    février 2007
    Localisation
    Londres
    Âge
    33
    Messages
    117

    Re : quantification des ARN

    Merci
    En fait j'utilse un kit, alors pour savoir ce qu'il y a dedans... C'est un tout nouveau, pour extraire l'ARN du sol. On l'avait pris pour essayer, sinon j'utiliserai un autre protocole après, mais je n'ai pas encore tout reçu.
    déjà, tant que l'autoclave est HS, je peux pas faire grand chose. Mais ce n'est pas trop urgent, ça va.
    Et encore merci
     


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