[Biologie Moléculaire] Problème avec gel d'acrylamide avec urée
Répondre à la discussion
Affichage des résultats 1 à 4 sur 4

Problème avec gel d'acrylamide avec urée



  1. #1
    fxmulder

    Unhappy Problème avec gel d'acrylamide avec urée


    ------

    Bonjour,

    J'ai quelques problèmes avec un manip de purification de protéines sur chromatogaphie d'affinité et j'aurais voulu avoir votre avis.

    L'expérience que je fais est la fixation d'ARN sur des billes de streptavidin-agarose. J'incube les billes avec des extraits nucléaires, je lave et j'élue les protéines avec un mélange d'acide acétique glacial 66% et 33mM MgCl2. Je précipite ensuite les protéines dans l'acétone (5 volumes) en présence de glycogène. Après plusieurs lavage Acétone/H20 5/1, je reprend mes protéines dans de l'urée 9M + 1mM DTT + 0,025% Bleu de bromophénol.
    En parralèle, je fais migrer des extraits nucléaires repris dans du tampon de dépot laemmli 2X. Le gel est un gel 10% Acryl/Bisacryl. Je l'ai coloré à l'argent avec le kit SilverQuest.

    voilà la photo de mon gel : http://www.zimagez.com/zimage/fxargent.php

    Donc, pour que vous compreniez :
    - 1ère piste : marqueurs moléculaires
    - 2ème et 3ème piste : Protéines reprises dans de l'urée avec chromatographie d'affinité.
    - 4ème piste : Extrait nucléaire Hela repris dans du laemmli.

    Comme vous le voyez, il y a un énorme problème de migration pour les pistes 2 et 3, alors qu'il n'y a aucun problème pour l'extrait nucléaire repris dans du laemmli... J'en déduit que le problème ne vient pas de la migration ni du gel.

    Vous auriez une idée ? Je vais faire quelques tests en parralèle, mais j'avoue que je ne comprends plus rien, cette manip marche normalement, ça fait des années que d'autres font exactement les mêmes choses. ça pourrait venir d'un lot d'urée foireux ?

    Merci beaucoup de votre aide!

    FX

    -----

  2. #2
    gorben

    Re : Problème avec gel d'acrylamide avec urée

    Salut,

    Ton image n'est pas accessible...

    A+

  3. #3
    fxmulder

    Re : Problème avec gel d'acrylamide avec urée

    ah??? Moi elle est accessible... Je la mets en pièce jointe au cas où.
    Images attachées Images attachées  

  4. #4
    Vinc

    Re : Problème avec gel d'acrylamide avec urée

    Bonjour!
    Ce n'est pas un problème de migration ni de gel : tu n'as tout simplement pas de protéines dans tes puits 2 et 3.
    Je pencherai pour un problème de précipitation....

    V.
    Dernière modification par Vinc ; 14/02/2008 à 12h32.
    Primum non nocere.

  5. A voir en vidéo sur Futura

Discussions similaires

  1. probleme avec vista -> lecture du son avec fichier .mpg
    Par invite7f1547ae dans le forum Logiciel - Software - Open Source
    Réponses: 7
    Dernier message: 23/01/2008, 23h28
  2. Problème avec un exo avec un prisme.
    Par invite05f3d245 dans le forum Mathématiques du collège et du lycée
    Réponses: 10
    Dernier message: 04/11/2007, 23h04
  3. Problème avec un exercice avec un prisme.
    Par invite05f3d245 dans le forum Mathématiques du collège et du lycée
    Réponses: 0
    Dernier message: 03/11/2007, 16h17
  4. Gel Shift : problème avec la compétition
    Par invite709e142f dans le forum Biologie
    Réponses: 4
    Dernier message: 01/02/2007, 02h08
  5. Problême sur Urée
    Par invite97d810f4 dans le forum Chimie
    Réponses: 5
    Dernier message: 13/11/2006, 20h17
Découvrez nos comparatifs produits sur le sport et la santé : thermomètre médical, soins personnels...