[Biologie Moléculaire] Hybridation in situ
Répondre à la discussion
Affichage des résultats 1 à 8 sur 8

Hybridation in situ



  1. #1
    invite5796d8ec

    Exclamation Hybridation in situ


    ------

    Bonjour,

    je suis en thèse et je dois réaliser une ISH or je n'en ai jamais fait de ma vie. j'ai récupéré des protocoles mais je voudrais savoir comment faire le design des amorces pour mon gène avec T3 et T7 ?? HELPPPPPPPPP

    merci beaucoup

    -----

  2. #2
    invite9e1fd470

    Re : Hybridation in situ

    Avec ton gène T3 ou T7 c'est quoi ce que tu veux dire ?

    J'ai fais pendant 3 mois des ISH et je faisais une transcription in vitro, donc mes sondes étaient de l'ARN. Pourquoi as-tu besoin d'amorces ?

  3. #3
    invite5796d8ec

    Exclamation Re : Hybridation in situ

    je pense que je ne maitrise pas bien le sujet, aurais tu une revue, article à me conseiller?? la synthese de ribosonde c'est vraiment conceptuel pour moi.... merci pour ta réponse

  4. #4
    piwi

    Re : Hybridation in situ

    Les amorces c'est pour designer la sonde que l'on va insérer dans un vecteur qu'il faudra ensuite linéariser par restriction selon l'orientation et transcrire (souvent avec la T3,la T7 ou la SP6 polymérase) pour obtenir de l'ARN.

    Le design de sonde n'est pas évident. Il vaut mieux ne pas prendre trop gros (500-800/1000 pb). Faire attention aux zones d'homologie. Donc bien étudier la protéine pour voir les domaines spécifiques et taper dans la région d'ARN correspondante.
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  5. A voir en vidéo sur Futura
  6. #5
    invite9e1fd470

    Re : Hybridation in situ

    Piwi, ce n'est pas la sonde que l'on insert dans le vecteur mais l'ADNc codant pour la sonde (il faut utiliser les bons mots sinon on s'embrouille facilement). Pour ce qui est de la taille de la sonde je suis même d'avis d'en faire une d'un maximum de 600 pb, tu est très largement spécifique avec une sonde de cette taille.

    As-tu un schéma de ta construction car je dois savoir comment tu as orienté ton ADNc et ou se trouve tes promoteurs pour les ARN polymérase. Car ta sonde doit être antisens, pour pouvoir par la suite s'hybrider de façon complémentaire avec l'ARNm du gène que tu recherche.

    Sinon pour ce qui est d'article je n'en possède pas, mais j'ai mon rapport de BTS qui explique bien le principe ainsi que des schémas que j'avais fait si celà t'intéresse.

    Cordialement

  7. #6
    piwi

    Re : Hybridation in situ

    Abus de language après des années d'in situ. Désolé pour le jargon.
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  8. #7
    inviteea98018d

    Re : Hybridation in situ

    Bonsoir John Irwin ; personnellement ça m'intéresse!! pouvez-vous me le passer s.v.p??
    merci d'avance

  9. #8
    invite5796d8ec

    Re : Hybridation in situ

    John tes schémas m'interressent fortement!!
    merci pour toutes ces reponses! j'y vois plus clair.

Discussions similaires

  1. [Divers] Utilisation de QDot en hybridation in situ
    Par invitef44c5647 dans le forum Biologie
    Réponses: 0
    Dernier message: 08/01/2009, 15h29
  2. Hybridation in situ
    Par invite89902e9c dans le forum Biologie
    Réponses: 4
    Dernier message: 06/09/2006, 12h40
  3. Hybridation in situ
    Par invite6c5226a2 dans le forum Biologie
    Réponses: 7
    Dernier message: 21/02/2006, 23h01
  4. hybridation in situ vs rapporteur
    Par vero0oo dans le forum Biologie
    Réponses: 7
    Dernier message: 02/04/2005, 00h49
  5. Cultures in situ...?
    Par inviteba0a4d6e dans le forum À la conquête de Mars
    Réponses: 4
    Dernier message: 19/07/2004, 18h34
Découvrez nos comparatifs produits sur le sport et la santé : thermomètre médical, soins personnels...