Milieu pour une croissance optimal

[aulie]

Bonjour,

Je souhaite avoir une concentration assez importante en E.coli (de l'ordre de la puissance de 12 dans l'idéal. Au pire 9).

Je viens enfin de reussir à atteindre tous juste 10^9, voici mon protocole :

1 colonie de 48h sur TBX dans 20 mL d'EPT
3h30 d'incubation (juste avant la fin de la phase expo, selon la courbe de croissance que j'ai faites)
Centrifugation, reprise du culot dans 10 mL d'EPT
3h30 d'incubation
Centrifugation, reprise du culot dans 5 ou 10 mL d'EPT = Suspension final.

J'aimerais avoir votre avis sur mon protocole, quelles sont les points à améliorer selon vous ?

J'avais penser à changer de milieu et de prendre un milieu plus riche. Peut être le Laurylsulfate, qu'en pensez vous ?

Merci d'avance pour vos réponses.
-----

[invite899b80e1]

Pourquoi ne fait tu pas une inoculation dans un grand volume? Tu centrifuge et tu resuspend dans un volume moindre adéquat et le tour est joué.

PS: Tu vx obtenir 10^12 CFU mais par quel unité ? L, mL, µL, kg, mg, g?

[aulie]

Quelle serait l'interet d'inoculer dans un plus grand volume ? 20 mL c'est trop insuffisant ?

Ah oui, désolé. Je voudrais 10^12 UFC/mL

[invite899b80e1]

Si tu pars d'un plus grand volume tu auras simplement plus de bactéries au total, le nombre de CFU/mL ne changera pas. Mais disons que si tu centrifuges 20mL de culture et que tu resuspends ton culot dans 10mL tu doubleras le nombre de CFU/mL. (Je pense que tu dois connaitre tout ca mais bon au cas où)

Par ailleurs je ne comprends pas l'intérêt de repartir deux fois de suite de la phase expo, à mon avis cette étapes ne nécessite pas d'être réaliser deux fois de suite (ca sert juste à éliminer le temps de latence).

Une autre piste à envisager selon ta souche serait de faire ta culture sous agitation plus ou moins forte.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitee8b3f97e]

Hello,

je suis d'accord avec Stonekiller, la meilleure solution est probablement d'ensemencer un plus grand volume de milieu. Il est très difficile de faire dépasser les 10^9 UFC/ml a une culture bactérienne.

[jmbowie]

si cela peut aider, le milieu le plus riche que je connaisse est le BHI