Digestion enzymatique

[ozzypo]

Bonjour j'ai deux questions:
1- Si l'on considère que 5 ug d'ADN plasmide de pUC19/GFP a été complètement digéré (par EcoRI), il est donc possible de calculer la quantité théorique d'ADN du gène de GFP que l'on peut isoler sur un gel d'agarose. Comment procéder? Quelle sera la quantité obtenue du gène GFP si l'on considère que le rendement d'isolement d'ADN (en l'occurence 5 ug) sur gel d'agarose est de 90%.

Je crois que pour répondre à cette question, il suffit de faire se calcul:
pUC19/GFP = 3,44 kpb, GFP = 0,74 kpb, (5ug x 0,74)/3,44= 1,08 ug. Sur gel on fait multiplie par 0,9 donc 0,97 ug.

2- Il existe plusieurs tampons 10X de digestion enzymatique différents. De quelle façon choisit-on celui qui dooit être utilisé dans notre expérience?

Merci

[Aqualung]

Les tampons sont choisis en fonction de leur compatibilité avec l'enzyme choisis, il existe des tableaux reprenant l'efficacité des enzymes (en %) en fonction du tampon utilisé.

Sinon (en supposant que le taux de récupération pourrait être de 90% alors qu'il me semble plus proche de 0,9% ) ton calcul me semble correct.