principe du gene rapporteur, sonde

[21poupette21]

bonjour,

je ne suis pas sure de bien comprendre le principe du gene rapporteur :
pour moi c'est :
on prend un gene dont on ne connait pas l'expression, on le combine avec un gene qu'on connait (ex :luciferase), on l'introduit dans la cellule (avec un virus par ex) et on regarde la quantité de lumière produite, celle ci étant proportionnelle à l'activité de la luciférase et donc du gene inconnu
j'ai bien compris?
le gene rapporteur est la luciférase?

et qu'est ce que la sonde? la luciférine (si oui, introduite comment?)?

merci de votre aide

[Edelweiss68]

Bonsoir,

on prend un gene dont on ne connait pas l'expression, on le combine avec un gene qu'on connait (ex :luciferase), on l'introduit dans la cellule (avec un virus par ex) et on regarde la quantité de lumière produite, celle ci étant proportionnelle à l'activité de la luciférase et donc du gene inconnu
j'ai bien compris?

La quantité d'oxyluciférine produite est proportionnelle à l'activité de la luciférase donc à l'activité du promoteur du gène rapporteur ainsi que du gène dont l'on cherche à mesurer l'expression.

le gene rapporteur est la luciférase?

Le gène rapporteur est le gène codant pr la luciférase.

et qu'est ce que la sonde? la luciférine (si oui, introduite comment?)?

Je pense que dans ce cas la sonde bioluminescente est l'oxyluciférine + émission de photons. Cette sonde s'accumule au site d'expression du gène rapporteur.

Voir diapos 11 à 16 : http://gramm2008.univ-lyon1.fr/abstracts/LCanaple.pdf

[21poupette21]

merci

j'ai bien compris maintenant

[Edelweiss68]

De rien!!