broyage de feuilles / test ELISA

[Timouloulou]

Bonjour à tous,

Je suis actuellement en train de réaliser des tests ELISA sur ail pour déterminer le taux de virosés OYDV. Nous les réalisons à partir de prélèvements de caïeux, que nous broyons à l'aide de billes (dans un vibro-broyeur).
Le problème est qu'il faut attendre que la culture soit bien avancée pour prélever les bulbes ; j'aimerais le faire sur les feuilles, mais je n'ai trouvé aucune technique pour broyer finement celles-ci. Les billes ne fonctionnent pas correctement dessus.

Connaîtriez-vous une technique qui permettrait de broyer les feuilles d'ail sans altérer la suite du test ELISA ? J'avais pensé à laisser tremper dans de l'acide sulfurique 12 M par exemple, ce qui permettrait de les broyer plus facilement, mais j'ai peur que cela puisse "zigouiller" les anticorps de coating, ou autre.

Au vu du prix des anticorps (coating et conjugate), je ne peux pas me permettre de faire plusieurs essais infructueux...

Merci d'avance pour vos réponses !

Tim

PS : je précise que je cherche une technique "à petite échelle", c'est-à-dire dans des microtubes (sur environ 500 µL). Je sais qu'il est possible de broyer des végétaux avec un broyeur-homogénéisateur (je ne sais pas si cela s'appelle comme ça, je l'utilisais en Angleterre), mais seulement sur grands volumes (je le faisais sur des tubes à essais et des matras pour centrifugeuse).

[Aqualung]

Pour broyer des feuilles ou des racines en petit volume, on utilise un pilon électrique, on a des têtes broyeuses stérilisables qu'on fixe à l'appareil qui broie en tournant.
Sinon il reste le pilon-mortier refroidit à l'azote liquide...ça fonctionne encore, tu broie une plus grosse quantité de feuille pour être sur d'en avoir assez dans l'eppendorf.

[Timouloulou]

Merci pour ta réponse Aqualung.

Je suppose que des deux, la méthode la plus efficace est le pilon électrique ?
Pour ce qui est de l'azote liquide, c'est vrai que je l'avais utilisé en Angleterre, mais les broyats n'étaient pas très fins.

En l'occurrence, il me faut des morceaux quasi inexistants, parce que pour prélever à la pipette de 200 µL c'est très compliqué... ou alors il faudrait que le labo investisse dans une petite centrifugeuse pour prélever le surnageant, mais je ne pense pas que ce soit un investissement intéressant vu le peu d'utilisation qu'on en ferait.

EDIT : après une recherche rapide, j'ai trouvé des micro pilons, mais pas de micro pilons électriques... Es-tu sûr(e) que cela s'appelle bien comme ça ?

[Aqualung]

tu peux ajouter des particules de sable stériles pour améliorer le broyage manuel...

concernant le nom précis je ne le connais pas, le labo en possède un stock depuis des années sans que j'ai eu à en commander. Ce sont des têtes broyeuses bleues en plastique autoclavable. je n'ai malheureusement pas plus d'informations