Bonjour,
je cherche à mettre au point une méthode de quantification en Evagreen d'un champignon dans des échantillons de maïs cultivés en serre, et tout a bien marché (dessin d'amorces spécifiques, quantification d'ADN du champignon pur...) mais dès que j'ai voulu passer les échantillons de maïs, j'ai obtenu des résultats non répétables, avec des pics de fluorescence qui ne correspondent pas au champignon et surtout qui changent d'un jour à l'autre. Etant donné que lorsque l'on mélange de l'ADN du champignon pur et de l'ADN de maïs pur on n'a aucun problème, j'ai pensé qu'il y avait des composés dans mes échantillons qui inhibaient la qPCR, mais j'ai testé plein de méthodes d'extraction et de purification et rien n'y fait... Il faut savoir que lorsque je passe mes échantillons en PCR, j'obtiens bien une bande correspondant au champignon, mais également une bande de au niveau du marqueur de 75 paires de bases... cette bande est toujours plus forte quand le champignon est présent.
Si quelqu'un a des idées, je suis intéressée!
Merci d'avance de vos réponses
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