[Microbiologie] identification d'une bactérie

[Lio22]

Bonjour, j'ai besoin de votre aide pour l'identification d'une bactérie, j'ai une forte suspicion de strepto soit strepto faecalis soit streptoA beta hémolitique mais bon je me trompe peut être... je vous donne les différentes observations:

Gram positif, coccis isolé ou en paire

Sur les différents milieux:
Cled: Gélose devenue jaune, colonie moyenne et jaune, bien isolée.
T.S. Colo moyenne, blanche.
S.S. 2,3 colos pas plus, mauve, centre un peu brun, gélose rose orange.
G.N. Colo moyenne, blanche, bien isolée.
EMB Reflet métalique verdâtre des colonie, en relief, petite colo, centre vert foncé et vert clair sur les contours.
HEK Gélose devenue jaune-rouge, colo orange claire, colo petite 1à2mm de diamètre, bien isolée.
SAB Colo blanche, 1-2mm de diamètre.
MH Colo blanche, 1-2 mm de diam.
MC Gélose rose-mauve, colo assez grosse, 2-3mm de diam., mauve au centre, rose claire sur les contours, bien isolée.
CHAP Traînée blanche avec décoloration de la gélose en jaune à ce niveau, le reste de la gélose est rose.

Tubes
BN Opaque, pas de dépôt.
CS Pas de colo sur la pente, pas de changement de couleur.
Kligher Culot jaune, pente jaune, chaînette dans le culot, colonies blanches abondante sur la pente, bulle, signifie un dégagement gazeux avec probable soulevement de la gélose très bientôt.

Voilà merci beaucoup de vérifier ma suspicion et de me corriger... il faut égallement savoir que toutes ces observations ont été faite après 24h
Merci
Lio

[Meningo]

Salut,
Tu as ensemencé tous ces milieux pour identifier un cocci Gram+ ? Ou c'est de la théorie ?
Je ne connais pas les abrévations des milieux que tu cites, et ceux que tu as utilsés je ne les connais pas très bien.

SAB Colo blanche, 1-2mm de diamètre.

SAB comme Sabouraud?

CHAP Traînée blanche avec décoloration de la gélose en jaune à ce niveau, le reste de la gélose est rose.

Staphylocoque, non? Je ne sais pas si les streptos poussent sur chapman.

Si tu veux t'assurer déjà que tu as affaire à un strepto, il faut que tu fasses une catalase.
Ensuite, dans toutes tes géloses, tu dois bien avoir une gélose au sang (mouton, cheval...). Tu regardes l'hémolyse : abs, alpha, beta. S'il est beta, tu pourras alors le typer : A à G.

Pourquoi tu penses à un faecalis (tu as un milieu avec du tellurite?) ?
Pourquoi tu penses à un strepto A? ( tu l'as deja typé?)

[Fabian]

Bonjour,

Je viens justement d'avoir un TP de microbio sur l'identification des bactéries. Mes connaissances ne sont pas énormes mais je rejoins en tout cas Meningo pour ce qui est de la gélose au sang et du test à la catalase. En tout cas, voici comment on a procédé pour notre identification:

1. Lecture des cultures sur milieux solides
- gélose au sang: mise en évidence Gram+ et Gram-
- Mac Conkey: mise en évidence Gram-
- CNA: mise en évidence Gram+

2. Coloration de Gram
> cela te permet de confirmer si tu as affaire à des GP ou des GN et de savoir par ailleurs s'il s'agit de bacilles ou de coques (observation au microscope)

3. En fonction des résultats obtenus, réaliser un test à la catalase (si GP) ou à la cytochrome-oxydase (si GN) pour affiner ton analyse (strepto, staphylo...)

4. Choix d'une galerie d'identification appropriée sur base du résultat obtenu au test précédent (ex: API 20 STREP, ID 32 STAPH...)

5. Procéder à l'identification proprement dite en interprétant la galerie d'identification et en déterminant le profil numérique

6. Si tu as effectivement à faire à un strepto, effectue un test de groupage sérologique et détermine également de quel type d'hémolyse il s'agit

Voilà, c'est peu être des conseils de débutant, mais on ne sait jamais, ça peut toujours aider.

Cordialement.

[Lio22]

Salut! merci déjà pour vos réponses... en fait je ne peux que regarder à partir des géloses que j'ai déjà cité et il n'y a pas de gélose au sang.
Cependant aujourd'hui j'ai pu faire sur mes colonies la catalase et elle est négative, le milieu SS (Salmonelle-Shigelle) m'a permis de voir qu'elles étaient aussi à H2S+.
J'ai aussi constaté que sur CHAP (Chapman) les colonies s'étaient très fortement développée après 48H d'incubation.
Je pense qu'il s'agit de streptocoque et plus précisement encore d'un streptocoque Beta hémolitique du groupe A.

Car, d'après tous ces renseignements j'arrive à trouver une bactérie Gram positif, coques en amas ou par 2 (Je pense m'être tromper lors de mon observation, il ne s'agit pas de bacilles mais de coques) ,glucose positif, lactose positif, mannose positif, H2S positif, catalase négative.

Pouvez-vous confirmer?? Merci beaucoup pour votre aide!


P.S.
CHAP = Chapman
SS = Salmonella-Shigella
GN = Gélose nutritive
BN = Bouillon nutritif (en tube)
EMB = Eosine bleu de méthylène
CLED = cystine lactose electrolyte deficient
MC = Mac Conkey
MH = Muller Hinton
SAB = Sabouraud
TS = Tripcase soja
HEK = Hektoen
CS = Citrate de simmons (en tube)

[Meningo]

Si tu es sur de ton gram et de ta catalase, c'est bien un streptocoque.

Pour identifier l'espèce, il faut effectuer d'autres tests. Les milieux que tu utilises ne te permettent pas de dire qu'il est beta-hemolytique (il faut un milieu avec du sang) et encore moins qu'il est de type A.

Es-tu sûr de ton gram ? Un petit bacille gram négatif (entérobactérie) peut être facilement pris pour un cocci gram+ en diplocoque....

Ca pousse sur des milieux pauvres (CLED...) je pencherais vers une entérobactérie H2S+
GLu+ Man+ lac+

[Lio22]

Salut, en fait je ne suis pas certain de mon gram c'est vrai qu'il est bizarre que le streptocoque pousse sur du SS et EMB aussi bien... mais sur chapman il pousse très bien... il faudra que je vérifie mon gram... mais il était très bleu donc c'est ma coloration qui n'était pas bonne si mon gram est mauvais... mais en fait je peux dire que c'est un strepto beta hémolitique de type A car je n'ai pas encore vu toutes les bactéries et je suis limité à un certain nombre... par ailleurs l'enterobacter y figure...
Merci beaucoup

[Lio22]

Re...
j'ai oublié de vous dire, aujourd'hui j'ai aussi constaté un petit tapis de colonies surrelevé de couleur rose-rouge avec le centre brun (H2S+), les colonies avaient l'air un peu sèche sur Salmonella-Shigella.
Peut-être que ca peut vous mettre sur la piste...
Merci
Lio

[gorben]

Salut

Selon mes souvenirs de lycée, si tu as un doute sur le gram, refait le!! c'est la base de l'identification et c'est de la que tout va partir. Ca ne prend que 15min à refaire et ca t'evite de nombreuses questions par la suite.
Il vaut mieux passer 1 heure à refaire 3 fois le gram si un doute existe plutot que de se lancer dans des milieux inadaptés. au final tu sera gagnant.

A+

[Lio22]

Salut!! Est-ce que si c'était un Gram négatif et bacille, plus toutes les autres caractéristiques sitées préalablement ca pourrait être un enterobacter??
Merci

[Meningo]

Tu devrais déjà avoir fini ton identification, non ? Si c'est un bacille gram - tu dois faire une galerie du style api 20E.

Quand je t'ai parlé des bacilles gram -, je parlais d'entérobactérie qui est un terme générique (et non pas enterobacter).

Sinon d'après les infos que tu as donné : H2S+, lac + (man+)...un citrobacter peut-être.

[Lio22]

Salut, tout d'abord merci pour vos réponses.
Je voudrais signaler à Meningo que je ne peux faire que les tests précedemment cités et par conséquent je ne peux pas me servir de galleries d'identifications qui me simplifieraient la tâche.
Le but ici est surtout basé sur les observations que l'on peut faire à partir des différents milieux.
C'est à dire savoir que la souche est glucose+, Lactose+, H2S+, etc...
Le nom m'importait simplement pour vérifier mon gram en réalité.
J'ai juste une dernière question comment peut-on justifier que dans le tube sur Kligher on à après 24H le lactose positif (pente jaune) et après 48H le lactose négatif (pente redevenue rouge)???
Merci beaucoup
Lio

[Harmonrabbj]

Bonjour, pour justifier ton kliger il faut avant tout te servir de la composition du milieu et ensuite tu reflechis au rôle des differents composant:

composition du kliger hajna

Extrait de viande de boeuf
Extrait de levure
Peptone
Chlorure de sodium
Citrate ferrique (révélateur de l'H2S)
thiosulfate de sodium (degrade l'H2S)
Lactose (glucide)
Glucose (glucide)
Rouge de Phenol
Agar

Pour le lactose - en 48h c'est normal, il y a oxydation du glucose en anaerobiose. cette oxydation produit du CO2 (acide volatile) qui fait virer dans un 1er temps la pente au jaune. Quand il n'y a plus de glucose et comme la souche ne sait pas utiliser le lactose ,elle degrade les peptones ce qui alcalinise la pente qui redevient rouge d'ou le caractere lactose -. si tu as d'autres questions n'hesite pas à demander.

[Lio22]

Merci beaucoup!!! Je n'ai pas d'autres questions pour le moment!
A bientôt
Lio

[Lio22]

Salut!!, Voilà juste pour vous tenir au courant, j'ai refait mon gram aujourd'hui et bon je me suis un peu trompé c'était un gram- ,coque isolé ou par paire, catalase+, glucose+, lactose+, mannitol+, H2S+.
Voilà si vous trouvez le nom de cette bactérie ou une piste du genre de bactérie et bien n'hesitez pas!!
Merci A bientôt!
Lio

[Meningo]

Salut,
Il ya eu du changement dans le gram...
Gram - : OK
cocci : je crois pas
Les cocci g- sont très exigeants (neisseria), ils ne pousseraient pas sur ces milieux.
Je pense plus à un bacille G-. Les entérobactéries (majorité des bacilles G-) sont des petits bacilles ayant une coloration dite "bipolaire" : c'est à dire que les extrémités sont plus foncées que le centre du bacille. Donc, quand on n'a pas l'habitude, on peut les prendre pour des cocci G- ou cocci G+.
Donc, vérifie ton Gram. C'est important d'être sûr de son gram, car toute l'identification en découle.

Glu+, cat+ : ca rentre dans la définition des entérobactéries

Man+ : peut-être, mais j'y crois pas trop. Je ne sais pas trop comment les entérobactéries poussent sur chapman. Es-tu sûr qu'il y a des colonies, et que ce sont bien elles qui font virer l'indicateur coloré ?

Lac+, H2S+ : il y en a pas des tonnes...