[Biologie Moléculaire] Plasmide dégradé
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Plasmide dégradé



  1. #1
    safitchka

    Plasmide dégradé


    ------

    Bonsoir
    j'ai réalisé une miniprep afin d'extraire le plasmide qui va me servir pour le clonage
    après visualisation sur gel , j'ai obtenu 2 bandes
    une correspond à la forme circulaire et l'autre à la forme linéaire
    Le lendemain ,j'ai testé mon plasmide avant d'effectuer la digestion enzymatique ,j'ai constaté qu'il est dégradé !!
    j'ai refait la miniprep plusieurs fois avec des nouvelles solutions , et j'ai obtenu toujours le même résultat !!
    un bon résultat le jour de l'extraction mais par le suite le plasmide se dégrade !!
    c'est dû à quoi ? et comment je peux éviter ce problème !

    -----

  2. #2
    mantOs

    Re : Plasmide dégradé

    Apres mini prep tu ne devrais pas voir beaucoup de plasmide lineaire mais voir surtout une forme supercoiled.

    C'est assez difficile a dire, mais je crois pas en la magie, donc tu as surement une contamination nuclease quelque part. Regarde en changeant TOUTES tes solutions (chose que tu as faite apparement) ainsi que tes pipettes/cones?
    Desole pour l'absence d'accentuation, je suis sur clavier QWERTY.

  3. #3
    safitchka

    Re : Plasmide dégradé

    oui j'ai déjà changé ttes mes solutions
    mes cônes et mes pipettes sont stériles !!
    y'a t'il pas une cause autre que la contamination par une nucléase ?

  4. #4
    mantOs

    Re : Plasmide dégradé

    Envoie nous des gels qu'on puisse voir ce que tu obtiens.
    Desole pour l'absence d'accentuation, je suis sur clavier QWERTY.

  5. A voir en vidéo sur Futura
  6. #5
    nowell

    Re : Plasmide dégradé

    Bonsoir

    tampon de resolubilisation de la miniprep peut-etre en cause....
    Vous utilisez quoi ? RB, TE, EUP ... ?

    Cordialement
    Si les faits ne correspondent pas à la théorie, changez les faits. (A. Einstein)

  7. #6
    safitchka

    Re : Plasmide dégradé

    j'utilise le TE
    c'était à cause du tampon et j'ai résolu le problème

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