Bonjour je vous sollicite car j’ai un petit soucis concernant l’immunomarquage pour la cytométrie de flux.
En cours on a vu un exemple nous disant qu’il été possible de réaliser un triple marquage sur des cellules leucocytaires pour regarder les monocytes et les Lymphocytes.
Pour cela on décide d’utiliser les Ac suivants couplés avec le marqueur associé :
Anti CD3 –FITC
Anti CD 4 –PE
Anti CD 14 – PE-Cy7

Notre prof nous a dit que pour faire de la cytométrie il nous faudrait 6 tubes
1 tube avec les cellules non marquées
1 tube avec les cellules + un type d’anticorps donc 3 tubes ici
1 tube avec le contrôle isotypique
1 tube avec les cellules + les 3 Ac

C’est ce qu’on appelle un triple marquage si j’ai bien compris.

Le prof nous a donné d’autres anticorps pour le même type de cellules et nous demande de faire les associations les plus judicieuses sachant qu’on peut pas mettre dans le même tube un même marqueur et j’avoue que je suis perdu…
On dispose de
Anti CD3 –FITC
Anti CD 4 –PE
Anti CD 14 – PE-Cy7
Anti CD20 – FITC
Anti CD56 – FITC
Anti CD8 – APC-Cy7

Comment faire? Je dois associé ce que je veux comparer c’est bien ça ?
Comment dans ce cas faire pour discriminer les CD3 des CD20 ou 56 ?
D’avance merci