Traitement au DEPC

[Cococcinelle]

Bonjour,

je suis en train d'organiser mon labo pour proceder tres prochainement a des RT-PCR. J'aimerais installer une station de travail tres clean, Rnase-free bien sur. Je n'ai trouve que des solutions commerciales pour debarasser tout le materiel de ces indesirables enzymes
Pourriez-vous m'indiquer quelle solution est la plus adaptee, et la meilleure marche?
Et puis aussi pour avoir de l'eau RNase free, vaut -il mieux acheter l'eau toute prete ou la traiter soi meme avec du DEPC? Est-ce ke le DEPC peut etre "fait maison" ou faut-il absolument l'acheter??
Merci bcp de votre aide d'avance ...

[Yoyo]

Salut

MOn experience avec les ARN me fait dire que la source principale de contamination par les RNAses est le pipetman. Utilise des embouts a filtre tu eviteras 95% des conta.
Ensuite pour ton eau le DEPC marche bien, mais si ton eau est de l'eau miliQ moi je m'en passe tres bien. En fait le mieux est de faire une verfi de ton eau pour voir si c'est necessaire ou pas. Je ne sais pas si tu peux le preparer toi meme, en revanche c'est assez contraignant de preparer de l'eau DEPC.

En fait il est clair qu'un minimum de propreté est necessaire, par contre certaines "precautions" sont totalement inutiles (genre les gants).

Yoyo

[piwi]

exactement comme Yoyo chez nous.

donc....
2-0

[Noun]

Pour nettoyer le materiel, j'utilise du NaOH 0.2N , SDS 0.1% et je rince ensuite a l'eau milliQ. C'est particulierement important pour les cuves d'electrophoreses que d'autres personnes utilisent pour des miniprep avec RNAses
Noun

[Cococcinelle]

Merci à tous pour vos reponses rapides... c'est genial ce forum!!
Les tips a filtres sont d'hors et deja commandes, je vais voir pour tester mon eau. Et si elle n'est psa top je commanderai...
Quant au nettoyage du materiel, merci, je vais tester alors la combinaison NaOH/SDS indiquee.
Ben vraiment c cool merci. J'espere popuvoir depanner kelkun aussi un jour.

[piwi]

Moi je lave mes pinces & Co à la soude 0.5N. Je ne mets pas de SDS.
J'imagine que l'un dans l'autre c'est kiff kiff et que l'esprit c'est de faire en sorte d'avoir des outils bien propres.

[Alinoeke]

Bonsoir à tous,

A propos du depc, est ce que quelqu'un connaît son mode d'action

Merci d'avance et bonne nuit

[Yoyo]

Salut

il modifie covalemment les proteases en se fixant au site actif.

Yoyo

[Alinoeke]

Merci pour cette réponse rapide !

Alinoe

[Tiscarab]

JE suis ok sauf pour les gants, je trouve que c'est beaucoup mieux d'en porter (nos mains sonts pleines de RNAses) et de les changer souvent!
Pour le DEPC, Diethyl Pyrocarbonate, c'est pour ce qui nous intéresse un inhibiteur de nucléase, donc de RNAse!

[jmbowie]

Salut

il modifie covalemment les proteases en se fixant au site actif.

Yoyo

De nucléases plutôt, non?

Tu es sûr pour les gants?

[Yoyo]

De nucléases plutôt, non?

Tu es sûr pour les gants?

oui evidemment ce sont les nucleases qui sont visées
oui pour les gants

Yoyo

[jmbowie]

oui evidemment ce sont les nucleases qui sont visées
oui pour les gants

Yoyo

Excuse ma curiosité, mais c est ta propre expérience ou des "on-dit" ou quelque chose qui a été montré? publié?
Merci

[Yoyo]

Ma longue experiences sur les ARN

yoyo

[piwi]

J'ai sans doute moins "d'experience" des ARNs que Yoyo mais moi non plus je n'utilise pas de DEPC ou particulièrement de gants avec les ARNs. Travailler proprement suffit à éviter les RNases.

Cordialement,
piwi