Bonsoir , Je suis entrain de galérer avec la mise au point de la technique IS PCR (inverse shifting PCR ) pour le génotypage de l’inversion 22 chez les hémophiles A sévères .
Cette technique comporte 3 etapes ( digestion enzymatique de l adn , ligation et PCR multiplex ) , nous avons un profile attendu qu'on doit retrouver chez un patient qui porte l’inversion 22 qui est la présence de 2 bandes avec des tailles bien précises mais malheureusement on n'arrive pas à
voir ce profile là sur le gel ; soit la PCR ne marche pas complétement et ne voit rien lors de la révélation ( sur plaque UV ) soit on retrouve qu'une seule bande.
Sachons que nous avons essayé plusieurs alternatives et rien n'a marché.
Donc s'il y a un d'entre vous qui a déjà essayé cette technique de inverse shifting PCR et qui a rencontré des obstacles ça serait très sympa de partager ses hypothèses et ses astuces avec moi. Merci d'avance