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Calcul de concentration de la protéine dans un échantillon (Exo L1)

  1. potassiumetc

    Date d'inscription
    février 2018
    Âge
    19
    Messages
    5

    Unhappy Calcul de concentration de la protéine dans un échantillon (Exo L1)

    Un échantillon de la protéine MurA, purifé et concentré, est gardé dans un tampon à pH 7.
    Selon des mesures d'absorbance à 280 nm, densité optique de cet échantillon=0.610.
    ▫ masse molaire moyenne d'un acide aminé dans une protéine=110 g/mol ;
    ▫ mesures de densité optique (absorbance) sont réalisées en plaçant 1 mL d'échantillon dans une cuvette d'1 cm d'épaisseur ;
    ▫ coefficients d'extinction molaire de F, Y et W à 280 nm:
    ▪ ε280 nm (F) = 0 M-1cm-1
    ▪ ε280 nm (Y) = 1400 M-1cm-1
    ▪ ε280 nm (W) = 5600 M-1cm-1
    ▫ coefficients sont additifs et indépendants de l'environnement chimique de chaque acide aminé ;
    ▫ le tampon de stockage utilisé et les autres acides aminés présents dans la protéine n'absorbent pas signifcativement la lumière UV à 280 nm

    a) calculer la concentration de la protéine présente dans l'échantillon en mol/L et mg/mL ;
    b) calculer la masse de protéine (en µg) présente dans 5 µL d'échantillon ;
    c) quelle serait la concentration de la protéine (en mol/L) si le pH était 8,5 (les autres conditions restant inchangées) ?
    d) quelle serait la densité optique du même échantillon après hydrolyse acide prolongée ? (en supposant que ce traitement ne dilue pas l'échantillon)

    -----

     


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  2. MathouNjomzus

    Date d'inscription
    février 2018
    Messages
    1

    Re : Calcul de concentration de la protéine dans un échantillon (Exo L1)

    Bonsoir Potassiumetc,

    Tout d'abord pour répondre à la première partie de la question a), il faut que tu te réfères à la loi de Beer-Lambert. Il s'agit de A = ε C l.
    A correspond à l'absorbance, soit la DO que tu as obtenu suite à tes expériences; ε t'es fourni; C est la concentration et l la longueur de ta cuve.
    Tu connais tous les coefficients, il te suffit juste d'ajuster l'équation de sorte à pouvoir calculer la concentration, en n'oubliant pas de tenir compte des unités.
    Pour connaitre la concentration massique, en mg/mL, tu dois utiliser la masse molaire qui t'es donnée.

    La question b) découle de la concentration massique que tu auras au préalable trouvée. Il te suffit de faire un simple produit en croix (=règle de 3).

    Concernant la question c), pense aux formes cationniques ou annioniques.

    Enfin, pour la dernière question, l'hydrolyse acide d'une protéine a pour rôle de cliver la protéine en peptides; est-ce que cette méthode impacte sur la concentration en acides aminés que tu analyses ensuite ?
     

  3. mauirose

    Date d'inscription
    février 2018
    Âge
    51
    Messages
    1

    Re : Calcul de concentration de la protéine dans un échantillon (Exo L1)

    Bonjour Potassiumetc,
    les explications qui t'ont été fournies sont correctes.
    concernant la dernière question, je pense que tu devrais prendre en compte la formule liant le pH au concentration d'acide de base et de protons.
    bonne journée
     


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