Calcul de la concentration en substrat

[Gnouminou]

Bonjour à tous
Voilà je bugg sr une question d'un TP et j'ai besoin d'aide.
Je dois donc rediger tout le sujet du TP pour repondre à la question ( casse tete ) mais bon ca fait parti du travail ^^
Voici le sujet du tp

On a : tampon citrate pH=5,5 150mM
Soude 0.2 M
Substrat (Para Nitrol Phenyl Phosphate) 12,8 . 10^-3 M
Enzyme (Phosphatase acide)
Preparer 2 séries de tubes à essai : 1 pour temoin substrat numeroté de T1 à T6, une autre pour les essais de E1 à E6

A- Repartition du substrat

Pour chaque serie : On introduit 0,5 mL de tampon citrate pH 5.5 dans les tubes numerotés 2 à 6 ( de E2 a E 6 et de T2 a T6)
On met 1mL de substrat 12,8.10^-3 M dans le tube 1 ( E1 et T1) puis en prelever 0.5mL que l'on ajoute dans le contenu du tube 2 . On preleve 0.5 mL du tube 2 que l'on ajoute au tube 3 etc...
Lorsque la repartition est fini, prelever 0.5 mL du tube 6 (qui doit contenir 1 mL) et jeter ce volume ( pour avoir 0.5 mL dans tous les tubes)

B- Preparation de la série temoin-substrat
Ajouter 1.5 mL de tampon citrate pH 5.5 à tous les tubes ( de T1 a T6)

C- Preparation de la série essais
Ajouter 1.480 mL de tampon citrate pH 5.5 à tous les tubes ( de E1 a E6)

D- Addition de l'enzyme
Tous les tubes sont preincubés au bain marie 37°C pendant 3 min
20 µL de solution de Phosphatase acide (l'enzyme) est additionné au tube E1, agitation, remise dans le bain marie puis on recommence 1 min apres pour le tube 2 .. jusqu'au tube 6 de la série "essais"
Apres 8 min d'incubation, ajouter 1 mL de soude 0,2 M dans les tubes essais en respectant le meme ordre et les meme intervalles de temps que lors de l'addition d'enzymes. Agiter. Arretez ensuite les tubes "temoin-substrat" en ajoutant egalement 1mL de soude 0,2 M ( l'hydrolyse du substrat est faible car pH 5.5)

QUESTION: Calculer les concentrations en substrat dans les tubes apres l'ajout de l'enzyme

Cette question laisse dire que l'on calcul seulement la concentration en substrat dans les tubes esais car on a pas mis d'enzyme dans les tubes temoins.

Merci de bien vouloir m'aider pour cette unique question

[Gnouminou]

une aide rapide s'il vous plait merc beaucoup je dois faire cette question avant mardi.
Merci

[HarleyApril]

C'est une série de dilution successives.
Dans le premier tube, tu mets 1mL de substrat.
La concentration est donc 12,8x10^-3mol soit 12,8mmol
J'en prends 0,5mL que je mets dans le tube numéro deux
Celui-ci contient déjà 0,5mL.
La concentration va donc être divisée par deux et sera de 6,4mL.
Je te laisse deviner que chaque dilution divisera la concentration par deux et finir les calculs ...

[Gnouminou]

en fait on doit calculer la concentration de chaque tubes apres les differentes dilution.
Mais le probleme n'est pas là en fait car je dois determiner la concentration en substrat apres l'ajout de l'enzyme et là tu me guide pour le calcul de la concentration en substrat avant l'ajout de l'enzyme.
En fait resumons:
dans le tube 1 : 12.8 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme
dans le tube 2 : 6.4 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme
dans le tube 3 : 3.2 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme
dans le tube 4 : 1.6 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme
dans le tube 5 : 0.8 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme
dans le tube 6 : 0.4 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme

Apres l'ajout d'enzyme, donc de 20 µL de phosphatase acide, on ajoute aussi de la soude.
La question c'est quelles sont les concentrations en substrat des differents tubes E1 à E6 apres l'ajout de l'enzyme

Merci de bien vouloir me repondre

[HarleyApril]

on ajoute 20µL et 1mL
tu peux négliger les 20µL
chaque tube contenait 1mL et tu ajoutes 1mL
qu'est-ce que ça peut bien faire comme dilution ?

Je crois que tu devrais y arriver

[Gnouminou]

non on a pas 1mL dans les tubes E1 a E6 parce qu'on rajoute 1.480 mL de citrate avant l'ajout d'enzyme. Vu que la biochimie c'est precis je ne pense pas qu'il fait negliger les 20 µL = 0.02 mL car 1.480 mL de citrate + 0.5 mL de la solution initiale + 20µL d'enzyme = 2.5 mL (un chiffre "facile")
Et aux 2.5 mL on ajoute encore 1 mL de la soude, ca fait donc une solution totale de 3.5 mL dans chaque tubes de E1 à E6
Donc ca fait beaucoup de solution et de concentration et je n'arrive pas à tirer dedans la concentration du substrat

Aidez moi s'il vous plait c'est urgent et je veux y arriver car je m'attarde beaucoup dans cette question en vain, je tourne autour du pot entre toutes ces solutions que l'on rajoute.
Merci beaucoup d'avance

PS: j'ai essayer d'exploiter la formule C1V1=C2V2 mais en vain je n'y arrive pas.

[HarleyApril]

la formule magique C1V1=C2V2 !
C1V1 correspond au nombre de mole de substrat
Tant que tu ajoutes d'autres composants, tu n'ajoutes pas de moles de substrat.
Ledit nombre de mole reste donc invariant.
La seule chose qui varie est donc le volume total.
Le titre après dilution est donc C2=C1V1/V2 avec
C1 titre initial
V1 volume initial
V2 volume total final

j'espère qu'avec ça, les dilutions ne te poseront plus jamais de problème.

[Gnouminou]

la formule magique C1V1=C2V2 !
C1V1 correspond au nombre de mole de substrat
Tant que tu ajoutes d'autres composants, tu n'ajoutes pas de moles de substrat.
Ledit nombre de mole reste donc invariant.
La seule chose qui varie est donc le volume total.
Le titre après dilution est donc C2=C1V1/V2 avec
C1 titre initial
V1 volume initial
V2 volume total final

j'espère qu'avec ça, les dilutions ne te poseront plus jamais de problème.

Ok merci


Donc si j'ai bien compris si on veut calculer la concentration en substrat dans les differents tubes E1 à E6 apres l'ajout de l'enzyme, on a

C2=C1V1/V2
avec C1 = concentration du substrat avant l'ajout d'enzyme ( les concentrations sont differentes du tube E1 aux tubes E6)
V1 = 0.5 mL ou 1.980 mL ? ( car avant l'ajout d'enzyme il y a 1.980 mL de solution dans les tubes car on a ajouté du citrate aus solutions initiales présentes dans les tubes E, soit 0.5 mL + 1.480 mL )
V2 = volume de la solution finale (0.5 + 1.480 + 0.02 mL + 1mL = 3.5 mL ou 0.5 + 1.480 + 0.02 mL = 2.5 mL ? vu que la soude est ajouté apres l'enzyme ...)
C2 : concentration en substrat apres l'ajout d'enzyme

Donc les 2 dernieres questions V1= 0.5 ou 1.980 mL et V2 = 2.5 ou 3.5 mL ?

Merci enormement

[HarleyApril]

pour ta gamme, tu as calculé les concentrations en substrat dans les tubes qui contiennent chacun 0,5mL (c'est dit dans l'énoncé)
Tu as donc les différentes valeurs de C1 et V1=0,5mL
C'est à partir de ça que tu vas faire une nouvelle dilution.
Dans les tubes témoins, comme dans les tubes essais, tu ajoutes ensuite 1,5mL. Tu as donc un volume total de 2mL (tu t'es trompé dans ton addition ). C'est là que la concentration est intéressante.
V2=2mL

La suite, c'est l'arrêt de la réaction, la concentration a moins d'intérêt.

Bonne continuation