Cinétique de la polyphenoloxydase

[chocapik]

bonjour!j'espere que vous allez bien!
alors jai un petit probleme a vous poser si quelqun peut maider
dans un travail pratique on effectue l'operation suivante:

2.1. Réactifs et matériel
- extrait enzymatique,
- S = solution de catéchol 3.10-2 mol/L en tampon acétate 0,05 mol/L ; pH 5,6,
- T = tampon acétate 0,05 mol/L ; pH 5,6,
- Si = solution de catéchol 3.10-2 mol/L en tampon acétate 0,05 mol/L ; pH 5,6 + acide benzoïque 2.10-3 mol/L,
- Ti = tampon acétate 0,05 mol/L ; pH 5,6 + acide benzoïque 2.10-3 mol/L,
- spectrophotomètre avec cuve thermostatée.

2.2. Préparation des solutions de substrat
sans inhibiteur:

S1 S2 S3 S4 S5 S6
S (mL) 20 20 15 10 7,5 5
T (mL) 0 10 15 20 22,5 25
avec inhibiteur:

Si1 Si2 Si3 Si4 Si5 Si6
Si (mL) 20 20 15 10 7,5 5
Ti (mL) 0 10 15 20 22,5 25

2.3. Mesures

Les mesures sont réalisées à 30°C sur un mélange de 3 mL de substrat et 100 µL d'extrait. Les absorbances sont lues à 400 nm.

2.4. Détermination des caractéristiques cinétiques
tracer la courbe de labsorbance en fonction de la concentration ensuite en fonction du temps!
Déterminer les vitesses initiales.
Calculer KM, VM et Ki.
Quel est l'effet de l'acide benzoïque ?

[Mickounet]

Bonsoir, qu'as tu résolu pour l'instant ?

Ce forum n'a pas pour politique de résoudre les exos mais d'aider.

Ou en es tu donc ?

Bonne soirée

[chocapik]

salut!
jai dessine les graphe mais je nai pas pu calculé les vitesses initiale
meme les constante km et vm ki

[Mickounet]

Rebonsoir,

Tu n'as pas besoin de calculer les Vi il faut les lire sur ta courbe. La question est là pour t'aider d'ailleurs^^

Tu prends la tangente à l'origine de chaque courbe de concentration en fonction du temps (la concentration t'es donnée par l'absorbance).

La pente de cette tangente te donnera Vi.

Tu traces ensuite Vi en fonction de C et si cela te donne une hyperbolle (ce que je pense si la cinétique est mickaelienne) tu fais double inverse de cette courbe 1/V en fonction de 1/S.

Cette représentation te donnera plus de précision. L'intersection avec l'axe des ordonnées te donne 1/Vm. L'intersection avec l'axe des abscisses te donne -1/Km.

Ensuite pour trouver Ki tu refais ce boulot en présence d'inhibiteur et tu vas voir un déplacement de tes courbes (si il affecte Vm c'est un inhibiteur non compétitif, si il affecte Km c'est un inhibiteur compétitif). Tu dois avoir les formules pour calculer Ki dans tes cours.

Bonne soirée et bon courage

[chocapik]

salut!!
mercii bcpppppppppppppppppppppppppppp pppppppppppppp!
je vais essayer ça !inchallah ça marche