Bonjour,
J'ai des exos a faire en génétique moléculaire, mais j'ai beaucoup de mal, car je ne comprends rien au cours ( je suis en erasmus, et je comprends casiment rien a ce que raconte de le prof !).
l'énoncé est :
BRCA 1 (breast cancer 1) es un gène humain de type suppresseur de tumeur, qui régule le cycle cellulaire et évite la prolifération incontrolée des cellules. Ce gène est constitué de 24 exons et couvre environ 81 Kb d' ADN génomique y son ARNm a une taille de 7.8Kb.Les mutations de perte de fonction de ce gène sont associées à certains types de cancers, spécialement le cancer du sein. Imaginons que nous voulons faire une expérience pour identifier d'autres gènes impliqués dans la fonction de ce gène, en se basant sur la fait que certains de ces gènes peuvent coder pour des proteines qui intéragissent avec la protéine BRCA1.
En supposant que nous allons identifier ces gènes en utilisant le système des doubles hybrides de levures,
1)Dessinez un schéma simple du vecteur " amorce" ( je ne suis pas sure de ca, j'ai pas tres bien compris l'expression qui était en espagnol !), en indiquant ses éléments les plus importants.
j'ai vraiment aucune idée pour ce qui est de ce schéma, moi j'ai juste compris que le systeme des doubles hybrides de levures, servait a savoir s'il y avait des intéractions entre protéines.
2)indiquer si vous cloneriez le cDNA ou l'ADN de BRCA1 dans le vecteur " amorce", en donnant une brève explication.
Pour cette question, moi je pense qu'il faut cloner plutot l'ADNc, car celui ci ne contient plus que les introns, et donc il y a seulement la partie codante, et de plus il est plus stable que l'ADN génomique. Mais la encore je je suis pas sure sure !
Une fois le vecteur exprimant BRCA1 généré, transformons des levures qui porte le gene his3 sous controle d'un promoteur régulé par gal4 avec ce vecteur et une génothèque qui contient les cDNAs obtenus de tissu mammaires humains.
Apres avoir semé le mélange de transformation dans un milieu sans histidine, on observe la croissance de 8 colonies.
3)indiquez pourquoi ces colonies croissent et ce que cela signifie.
4)Quelles étapes suivrez vous ensuite pour identifier les genes clonés dans les plasmides des colonies qui croissent dans le milieu dans histidine.
5)Croyez vous qu'il faudrait faire une expérience supplémentaire pour confirmer ce resultat ?
Et donc je suis en totale galère avec toutes ces questions, si quelqu'un peut m'aider ca serait super !
Merci
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