Préparation d'un tampon Tris NaCl EDTA

[invite1303786e]

J'ai besoin d'une petite vérif car ça fait bien longtemps que je n'ai pas eu à calculer ce genre de choses.

JE suis en train de faire un exercice où on me demande de préparer 500mL d'un tampon Tris NaCl EDTA suivant:
- 100mM de Tris (M= 121,1g/mol)
- 0,05M NaCl (M= 58,5g/mol)
- 1mM EDTA (M= 187g/mol) à pH 7,5

On me donne aussi les masses molaires de HCL, agarose et NaOH (je vois pas à quel moment les utiliser mais je préfère avoir une vérification)

Ça me parait trop simple que je doute, et je me dis "c'est pas possible, tu dois te tromper".

Pour le Tris, j'applique la formule m = M * C * V soit m = 121,1 * (100.10-3) * (500*10-3).
Même type de calcul pour NaCL et EDTA.

Je me trompe?

Pour le protocole, il suffit de peser le tris, le mettre dans une fiole jaugée 400mL, mettre un peu d'eau, puis ajouter le NaCl, mettre de l'eau à nouveau et bien mélanger. (là aussi, ça me parait trop simple...) Et là, par contre, je plante. Faut-il mettre l'EDTA, puis rajouter de l'eau, et terminer par un ajout de NaOH ou HCL pour aller à pH 7,5 ?

Ou faut-il faire des solutions stock des 3 composants genre 10mL de Tris 10M, 50mL de NaCl 1M et 10ml de EDTA 1M? Puis prendre un certain volume (à calculer par Ci*Vi = Cf*Vf) de chacune des 3 solutions mères pour faire le tampon? (soit avec un rapide calcul de tête prendre 5mL Tris, 25mL NaCl et 0,5mL EDTA)

Bref, je reprends mes études après plusieurs années de "pause" et je préfère obtenir confirmation avant de me planter :P

Merci d'avance à tous ceux qui pourront m'aider.
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[invite1303786e]

Personne pour m'aider? Je suis toujours au même point, à savoir faut-il faire des solutions stocks de chaque produit, puis prendre un peu de chaque solution pour faire la solution finale ou peut-on faire directement la solution en mélangeant chaque composé directement ensemble?

[piwi]

Si vous partez de poudres, l'EDTA se dissout très mal dans l'eau si on n'ajuste pas le pH (pH 7 si je me souviens bien). Du coup, en pratique, il est mieux de préparer une solution stock d'EDTA (500mM en règle générale). Pour le reste, il n'y a rien de particulier, votre démarche semble correcte.

piwi

[Flyingbike]

Si vous partez de poudres, l'EDTA se dissout très mal dans l'eau si on n'ajuste pas le pH (pH 7 si je me souviens bien). Du coup, en pratique, il est mieux de préparer une solution stock d'EDTA (500mM en règle générale). Pour le reste, il n'y a rien de particulier, votre démarche semble correcte.

piwi

effectivement l'EDTA n'est pas évident a préparer, mais du coup vu que sa solution en contient peu, ça serait plus simple de peser la poudre directement.
Pour faire une solution stock a 0,5M, il faut le dissoudre en pH basique et redescendre a 8 (je ne sais pas si 7 ou 7,5 ça ne reprécipite pas l'EDTA).

[A voir en vidéo sur Futura]

[piwi]

Pour l'EDTA, je ne me souviens plus du pH. Il faut dire qu'en général on n'en prépare pas tous les matins étant donné que c'est embêtant. La pratique courante de labo est vraiment d'avoir une solution stock. Du coup, j'ai du en faire deux fois en 6 ans ^_^

[invite1303786e]

Hum, c'est bien ce qui me semblait, mais j'en était pas sûre. Merci pour vos réponses. Ayant arrêté la fac il y a un bon bout de temps maintenant, et reprenant l'an prochain, je révise un peu mais ce ne sont que de lointains souvenirs.

Merci à vous :P