L2 science de la vie / Biochimie

[Etoile.cl68]

Bonjour,

Voilà mon exercice,

Une solution renfermant les protéines suivantes, albumine (pI : 4,6), uréase (pI : 5) et
myoglobine (pI : 7,5) est déposée sur une colonne de DEAE cellulose (échangeuse d’anions) à pH
6,5. La colonne est ensuite lavée avec un tampon à pH 6,5 puis avec un tampon pH 6,5 renfermant
des quantités croissantes de NaCl. Dans quel ordre les protéines sortiront de la colonne ? Justifier
votre réponse ?

Pour essayer d'y répondre j'ai fait le diagramme des pH pour chaque protéine.
Pour l'ovalbumine, j'ai mis la charge + jusqu’à 4,6 puis la charge - en idiquant la forme zwitterion au niveau de 4,6. J'ai fais le même procéder pour chaque protéine puis j'ai noté le pH = 6,5 sur chaque diagramme.
Pour l'ovalbumine il est alors chargé - à ce pH, pour l'uréase chargé - et pour la myoglobine chargé +. La colonne retient les protéines - donc on peut déjà dire que ce sera la myologline élué en dernier.

Mais pour l'uréase et l'albumine je ne sais pas comment faire pour savoir lequel sera éluer le premier.
Peut-être dans cette ordre:
1. myoglobine
2. uréase
3. albumine

Pouvez-vous confirmer si cela est juste, et si non me dire ou je me suis trompée? Comment peut-on prouver cette affirmation ?

Merci de votre compréhension
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[Tibosax]

Je ne sais pas si tu t'es trompé ou si tu as fait une faute d’inattention (car l'ordre donné ensuite est bon) : la myoglobine étant effectivement chargée positivement à ce pH, elle sort en premier car elle n'est pas retenue par la chromatographie échangeuse d'anions. Ensuite vient l'uréase, qui est moins statistiquement chargée que l'albumine, car son pI est plus proche du pH utilisé lors de l'élution. Vient ensuite l'albumine.

[Etoile.cl68]

D'accord merci, mais faudrait-il pas dire que le NaCl permet élution ?

[Tibosax]

Si bien sûr, le NaCl apporte des ions chargés négativement qui "prennent la place" des protéines, ce qui provoque l'élution.

[A voir en vidéo sur Futura]