La synthèse s'effectue à partir du glycérol obtenu soit à partir du glycérol (action de la glycérol kinase, consommation d'un ATP) ou du dihydroxyacétone phosphate (action de la glycérol 3 P déshydrogénase, consommation d'un NADH+H+)

Donc, à partir du glycerol 3 phosphaste on a:
glycerol 3 P + 2 acyl-CoA -> acide phosphatidique + 2 CoA
On forme l'acide phosphatidique (aussi nommé phosphatidate)

Puis action de la phosphatidate phosphatase:
acide phosphatidique + H2O -> 1,2 diacylglycerol + Pi

Le 1,2 diacyglycerol joue ensuite le rôle de précurseur dans la synthèse des triacylglycérols et des phospholipides neutres (phosphatidylcholines et phosphatidyléthanolamines).