Cellules souches

[Yliane]

Bonjour à tous

Je travail en ce moment sur un exposé sur les cellules souches, et ma partie concerne "les techniques", techniques de quoi me direz vous? Les techniques de mise en culture des cellules souches, comment les prélève t-on( pour l'embryon je sais à peu pres : on prend les cellules à l'interieur du blastocyte et on les met en culture, mais pour l'adulte je ne sais pas), qu'est ce qu'on leur fait subir, dans quel milieu on les mets, comment les fait-on se différencier etc etc.

Il y a très peu d'information à ce sujet : je suppose que justement c'est trop technique pour que l'on en parle dans les magazines mais moi ca m'interesse!!

Je suis au niveau d'étude de L1 en biologie, mais n'hésitez pas à employer un vocabulaire compliqué! lol

et si vous avez des choses à rajouter, des applications, des renseignements sur certaine thérapie etc, ca peut m'interesser aussi

merci d'avance!

Lydie

[piwi]

Super technique même!!
Qu'est ce que c'est que cette question? Vous voulez de la technique pure et dure ou quand même quelque chose d'abordable?

piwi

[Yliane]

Quelque chose d'abordable, les étapes avec un peu de détails, les éléments principals quoi

[mantOs]

Les cellules souches possèdent un marqueur spécifique permettant leur purification.
Ce marqueur est le CD34.

Après je ne connais pas du tout la manip de purification mais cela doit se faire sur colonne en purification d'affinité.

[Akïn]

Bonjour,

Je me souviens qu'une technique au FACS permet de les différencier parmi d'autres cellules. Un marquage de type Hoest le permettait. Je vais voir si j'ai le temps de rechercher l'information =)

[Akïn]

Rebonjour,

J'ai cherché le protocole sur lequel je m'étais basé pour isoler les cellules souches de mes échantillons.

Tout d'abord, il ne s'agit pas du Hoest mais du "Hoechst 33342".
Je te place ici quelques protocoles qui explique comment obtenir avec un FACS les cellules souches (notée SP sur la page 6/7 du site suivant) http://liver-hsc.scgap.org/Protocols...t_protocol.pdf Comme tu peux le voir, il s'agit d'une très faible population (même si ici la population utilisée était d'origine sanguine).

Sur le schéma ici, tu peux voir l'allure que donne le FACS. Sont entourées les cellules souches http://breast-cancer-research.com/co...s/bcr547-1.jpg

C'est la seule méthode que je connaisse pour les identifier (sachant que le FACS a la faculté de pouvoir trier ces cellules (et seulement celle-ci)).

J'espère que j'ai été asez clair

[mantOs]

Et une purification en colonne d'affinité avec des anticorps anti CD34 ca marche pas?

Cordialement
Paul

[Akïn]

Yop,

Effectivement, ta colonne marchera mais je sais que le CD34 est un moyen certe de reconnaitre les cellules souches mais egalement ... d'autres cellules qui en sont porteuses.

Au final, s'il utilise le choix, il faut s'assurer que l'ensemble des cellules de son échantillons sont dépourvues de ce marqueur.

S'il n'y a pas moyen de faire autrement, je pense qu'il faut utiliser deux colonnes: la première avec CD34, récupérer les cellules ayant adhéré à la colonne.
La deuxième porteur d'un marqueur spécifique absent des cellules souches.

Qu'en penses tu mantos ?

[mantOs]

Oui mais CD34 est un marqueur spécifique des cellules souches, marqueur qui n'est pas exprimé sur d'autres types cellulaire, enfin il semble

De plus avec ta technique de 2eme colonne, tu ne sais pas si tu éluera que les cellules souches car d'autres types cellulaires ont peut etre le marqueur CD34 et absence du marqueur de purification de ta 2eme colonne, à moins de vraiment recenser les différents marqueurs cellulaires et de bien discriminer les marqueurs .

[Akïn]

Yep, je suis d'accord avec toi pour ce qui est de procéder avec deux colonnes.

Toutefois, les données de la literrature montrait quand je faisais mes manip que le CD34 etait présent dans d'autres types cellulaires (ce qui m'a d'ailleurs valu de fausses joie car je pensais avoir mis la main sur un filon de cellules souches ):
- certaines cellules endothéliales
- certaines cellules du foie
- certaines cellules cancéreuses

A voir sur quel genre de cellules on travaille à l'origine.

[mantOs]

Ah j'ai trouvé des infos sur la purification.
En effet ca dépend sur quel tissu tu travailles.
Pour les cellules souches sanguines apparement c'est possible :

Envoyé par Résumé / Abstract

Depuis peu, les cellules souches caractérisées par le marqueur antigénique CD34, peuvent être sélectionnées positivement par un anticorps monoclonal anti CD34 en utilisant une technique dimmunoabsorption biotine avidine.

http://cat.inist.fr/?aModele=afficheN&cpsidt=2935706

[Yliane]

Merci de vos réponses, en effet, c'est très technique lol.

C'est marrant car avec les cellules souches il n'y a aucune demi mesure, soit c'est compltement vulgarisé et limite erronnée tellement c'est simplifié, soit c'est trop complexe (et en anglais ) lool.

Enfin bon, je vais me pencher là dessus, merci beaucoup

[Akïn]

Envoyé par Yliane

Merci de vos réponses, en effet, c'est très technique lol.

C'est marrant car avec les cellules souches il n'y a aucune demi mesure, soit c'est compltement vulgarisé et limite erronnée tellement c'est simplifié, soit c'est trop complexe (et en anglais ) lool.

Enfin bon, je vais me pencher là dessus, merci beaucoup

Cherche sur pubmed avec le mot clé "stem cell" ainsi que le tissu sur lequel tu veux travailler, tu verras que c'est en plein boum !

De plus, on discerne les cellules souches et cellules souches embryonnaires (seul 5 laboratoires en France ont reçu l'acréditation pour travailler dessus pour info). Essai de chercher des infos, maintenant, je crois que tu as tout pour faire ton taf =)

[Yliane]

Merchi beaucoup Akin Ca va m'être très utile