cellules souches

[plume16]

bonjour,
Sauriez-vous comment mettre en évidence des cellules souches hématopoiétiques de la moelle osseuse sans marqueurs? Et peut-on remarquer la différenciation des différentes cellules du sang au microscope ou avec des réactions chimiques? merci de votre aide !!

[mantOs]

Tu peux FACS avec un anticorps anti CD34 ( spécifique des cellules souches )

[plume16]

excuse-moi je ne suis pas une spécialiste...lol...alors pourrais-tu m'expliquer ce que signifie FACS...et me détailler les manips stp?? merci beaucoup !!!!

[mikael69]

Le FACS (=fluorescence activated cell sorting); c'est une méthode de tri cellulaire. Tu marque une population de cellule avec des sondes fluorescentes spécifiques de ce que tu cherche à étudier. Cette population de cellules tu la passe dans une machine dont le principe est assez simple: avec une "pompe" tu fais passer tes cellules une par une dans un très fin capillaire au travers de celui ci un laser permet d'exciter les fluorophores que tu a employé. La machine est alors à meme de lire la quantité de fluo que tu détécte le le type de fluo si tu en as mis différents types. et fonction de ce que la machine mesure tu peux séparer ainsi les cellules une par une via une différence de potentiel.
En espératn que ca t'aide un peu en tout cas.

[plume16]

oui ça m'aide même beaucoup !!!! merci !!!!!

[Vinc]

Salut!
Si tu ne peux pas utiliser de marqueurs le CD34 n'est pas valable.... Tu peux utiliser la rétention du marquage du DNA.
La réplication n'est pas semi-conservative pour les cellules souches et donc elles gardent le marquage du DNA au Hoechst 33342....mais pas les cellules adjacentes

A+
Vinc

[plume16]

Comment se passe ce marquage au DNA? et quelle est la nature du DNA? merci !!

[Vinc]

Salut !
C'est un marquage de l'ADN tout bête
Le Hoechst (comme le DAPI) ets un intercalant du DNA (=ADN si c'était ta question) donc si la cellule souche garde toujours les 2 mêmes brins, le marquage va rester au fur et à mesure des divisions de la cellule....

Vinc

[plume16]

mais est-ce des substances radioactives?

[Vinc]

Non pas du tout! Le DAPI et le Hoechst sont juste des sortes de "colorants". C'est grâce à eux que tu peux voir les noyaux des celulles en bleu sur les photos d'immunofluorescence.

A+
Vinc