[Revision] Besoin d'aide sur un exercice

[nic1305]

Salut a tous,

je viens de me mettre au revision pour mon deug bio et je bute sur un exercice


Voici le probleme :

Pourquoi lorsqu'on realise des co-transfections d'un gene neo marked alu dans des cellules HELA avec un vecteur CMV-L1, permettant l'expression des LINES (Line+), on obtient un grand nombre de clone G418R. Et lorsque c'est réalisé avec un vecteur CMV-Galactose, permettant l'expression de la galactosidos (Line-), le résultat est preque nul ?

Voila
merci d'avance a tous

[Yoyo]

Salut,

Bon je ne suis pas certains d'avoir compris tout l'enonce (il manque pas mal d'éléments pour pouvoir etre certains).
Mais a priori, je dirais que ton vecteur CMV-L1 a permis l'integration du gene Neo (qui confere la resistance au G418). Alors que le vecteur control n'exprimant que la B-galactosidase, lui n'a rien fait.
En conclusion ton vecteur L1 exprime une proteine (transposase?) facilitant grandement l'integration de ton gene néo.

Yoyo

[9herve]

Moi je dirai, que le vecteur contient des LINEs qui sont des séquences hautement répétées dans le génome, donc cela devrait favoriser la recombinaison et l'intégration... mais c'est pas garanti...
PS : qu'elle idée de poser des exos comme ça en DEUG

[Yoyo]

Bonsoir,

Ah oui en effet c'est aussi une possibilite... les elements permettraient l'integration du vecteur neo, et en meme temps le gene cotransfecté. En fait faudrait connaitre la suite de l'exo pour voir si le but est de montrer que l'integration d'un vecteur favorise l'insertion du deuxieme.
D'un autre cote les elements LINES sont des transposons, il est donc possible qu'il existe une transposase ?

il manque des infos

Yoyo

[9herve]

Oui mais pour l'intégration de séquences d'intéret par un transposonvia la transposase , ils faut que les séquences d'intérêt soient entre les LTR du transposon. Or, il semblerait , vu l'énoncé, que c'est le LINE qui est au milieu des séquences d'intérêt...

[nic1305]

merci, moi je pensais en fait a l integrase qui fait passer la sequence line en sequence alu et par les effets cis et trans de la rtase des line on avait expression des clones vecteurs line et pas galactose...

[Yoyo]

salut,

MAis si j'ai bien compris ton vecteur qui possede les LINES et celui qui possede Neo, sont deux vecteurs differents non?

Yoyo

[nic1305]

en fait on isole le promoteur et entre les 2 on met un intron donc si il ya transcription il y a epissage donc d un ARN et si il y a reversetranscription il y aura 1 gene resistant .
donc on met le gene dans une cellule qui n exprime pas line et on ajoute le gene d expression avec le promoteur et line, on cotransfecte et on regarde lesquelles sont resistantes donc si la rt codé par line reversetranscripte le genes on aura des genes resistants a neo.

[9herve]

OK j'avais pas compris lénnoncé, c'est donc de cela que tu parles :http://www.nature.com/cgi-taf/DynaPa...=doi1093859165

[Yoyo]

salut,

C'est en effet plus clair merci

Yoyo

[nic1305]

salut
merci hervé mais la page que tu me donnes est en 404 : ca marche pas

je reessaierais tout a leur ou si t'arrives a faire un copier coler

merci d'avance

[nic1305]

merci j'ai reussi a la charger mais l'anglais, c'est pas trop mon fort.
si vous pouviez me faire un petit resumé parce que meme avec la traduction de wanadoo.fr j'arrive pas a tout comprendre.

merci encore