immunoblot

[biscotte91]

Coucou tout le monde,

j'aimerais une confirmation :

est ce que le southern blot est bien une électrophorèse faite avec des fragments d'ADN

le northern blot avec des ARN

et le western-blot avec des protéines ??

merci parce que je m'embrouille un peu....

[LXR]

C'est tout à fait ça. Et pour le western, on détecte les protéines avec un anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt, cet anticorps lui-même porteur d'une activité détectable (fluorescence, activité enzymatique, radioactivité). C'est donc une variante du SDS-PAGE, car c'est toujours une électrophorèse de protéines sauf qu'on n'est pas en conditions dénaturantes et qu'on détecte avec un anticorps. Pour Northern et Southern, je suppose que tu sais.

Greg

[Vinc]

Salut!

Citation:

Posté par LXR

Et pour le western, on détecte les protéines avec un anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt, cet anticorps lui-même porteur d'une activité détectable (fluorescence, activité enzymatique, radioactivité).

Non pas forcément! Tu peux très bien utiliser un anticorps secondaire qui détecte le fc de ton anticorps primaire, c'est d'ailleurs ce qui ets majoritairement utilisé.

Citation:

Posté par LXR

C'est donc une variante du SDS-PAGE, car c'est toujours une électrophorèse de protéines sauf qu'on n'est pas en conditions dénaturantes et qu'on détecte avec un anticorps.

????? Je ne comprends pas du tout ce que tu veux dire. Que tu détectes avecun anticorps ou deux tu peux te placer en conditions dénaturantes.
Le SDS PAGE ne donne pas d'indication sur la méthode de détection.

A+
Vinc

[LXR]

Oui c'est vrai que je me suis mal exprimé. Je voulais dire que l'étape précedent un western est un SDS-PAGE, sauf qu'on ne se place pas obligatoirement en conditions dénaturantes (donc dans ce cas, il vaut mieux utiliser l'expression de "gel migration" que SDS-PAGE). Mais vu que je ne voulais pas embrouiller biscotte91, j'ai pris un raccourci pas tout à fait exact.

Et en effet l'utilisation d'un anticorps secondaire reconnaissant l'anticorps primaire est désormais utilisé la plupart du temps (pour ne pas dire tout le temps ), mais là encore j'ai voulu simplifier pour que ce soit compréhensible, en introduisant en même temps la notion de détection par anticorps couplé à une activité physique, chimique ou biochimique détectable .

Cordialement,

Greg

[Toll]

bonjour,

quand on parle de western blot, par defaut on parle de la technique en condition denaturante ( avec SDS et beta mercapto ou DTT).

si on est pas en conditions denaturantes, cela sera preciser comme "native gel migration" dans les publis.
toll

[biscotte91]

oh merci !! que vous etes forts !!

[Yoyo]

je rajouterai juste pour finir que c'est Southern-blot (avec une majuscule) alors que les autres n'ont pas de majuscule, car c'est Monsieur Southern edwin qui a mis au point la technique en 1970 alors que les autres, western (1980), northern n'ont été baptisées que pour faire un clein d'oeil.

Yoyo

[Toll]

Citation:

Posté par Yoyo

je rajouterai juste pour finir que c'est Southern-blot (avec une majuscule) alors que les autres n'ont pas de majuscule, car c'est Monsieur Southern edwin qui a mis au point la technique en 1970 alors que les autres, western (1980), northern n'ont été baptisées que pour faire un clein d'oeil.

Yoyo

a quand le eastern blot?
migration de lipides (autres que chromato), de glucides?

[Tiscarab]

Citation:

Posté par Yoyo

je rajouterai juste pour finir que c'est Southern-blot (avec une majuscule) alors que les autres n'ont pas de majuscule, car c'est Monsieur Southern edwin qui a mis au point la technique en 1970 alors que les autres, western (1980), northern n'ont été baptisées que pour faire un clein d'oeil.

Yoyo

Salut!
Yoyo, juste pour t'embêter, tu mets un P majuscule à poubelle?!!

sinon les conditions dénaturantes sont remplies par l'utilisation de SDS, le 2-mercaptoethanol et le DTT c'est encore autre chose!
++