transgenèse

jessy1334 · 22/06/2005, 16h21

Bonjour,

Vous savez ce qu'est un vecteur binaire, un vecteur désarmé, un transfert direct d'ADN dans les cellules végétale.

Vous savez également comment introduire un gène d'intérêt dans un vecteur désarmé, ou de l'ADN exogène dans un génome chloroplastique.

Sélectionner des évènement de transformation des cellules végétales, obtenir des animaux transgénique, réaliser une complémentation hétérologue dans la levure, réaliser un transfert direct d'ADN dans une cellule végétal, vous semble facile.

Et bien pour moi tout cela c'est du chinois...
S'il vous plait aidez moi

Merci, merci, merci ...
Jessy

Np81 · 23/06/2005, 14h14

Salut,
C'est beaucoup de questions en même temps sans qu'on sache vraiment jusqu'où aller dans le détail ni quel est ton niveau...

Réponses à tes 1ères questions :
- Vecteur binaire : c'est un vecteur de transfert de gène(s) et un vecteur de clonage en même temps.
- Vecteur désarmé : vecteur de gènes auquel on a enlevé son pouvoir pathogène (ex : plasmide de la bactérie Agrobacterium tumefacies dont les gènes de virulence responsables de la galle du collet ont été retirés)
- Transfert direct d'ADN : introduction dans une cellule d'ADN étranger par méthode physique (ex : canon à particules) ou chimique (utilisation de PEG). A l'opposé on parle de transformation biologique (ex : utilisation d' A. tumefaciens)

Enfin, peut-être peux-tu aller surfer sur ces sites qui apporteront des réponses à certaines de tes questions :
http://www.inrp.fr/Acces/biotic/biom...en/accueil.htm
http://www.gnis-pedagogie.org/pages/...hap3/intro.htm

jessy1334 · 23/06/2005, 15h07

bonjour,

oui c'est vrai, je demande beaucoup de chose à la fois, mais on m'a toujours dit de demander le maximum pour avoir le minimum!!!

non je plaisante, c'est juste que j'ai un partiel trés bientot (licence) et que j'ai beaucoup de lacune.

bon revenons à nos moutons!!!

vecteur désarmé, transfert direct d'adn ok j'ai compris,
mais un vecteur binaire???

est ce que c'est un vecteur avec des caracteristiques particulières ou est ce que l'on appele vecteur binaire tous les vecteurs de transfert et les caractéristiques varient d'un vecteur à l'autre.

ex: un vecteur binaire, si on lui retire sa région VIR, devient vecteur désarmé, à moins qu'un vecteur binaire soit toujours désarmé???

du coup j'ai un doute sur autre chose, le vecteur pTi désarmé possède une région VIR???

oulala y'a du boulot!!!

Np81 · 28/06/2005, 13h41

Citation:

Posté par jessy1334

mais un vecteur binaire???
est ce que c'est un vecteur avec des caracteristiques particulières ou est ce que l'on appele vecteur binaire tous les vecteurs de transfert et les caractéristiques varient d'un vecteur à l'autre.

Ben j'ai répondu pourtant. C'est un vecteur, donc un système porteur d'une séquence d'adn destinée à être transférée dans un autre organisme. Mais ce même vecteur peut-être utilisé pour le clonage, c'est-à-dire qu'il est capable de se répliquer dans une bactérie E. coli par ex pour multiplier cette séquence d'adn qui nous intéresse. C'est l'étape nécessaire de multiplication de la construction génétique pour disposer d'une quantité suffisante d'adn à intégrer afin d'avoir des chances raisonnables de réussir la transgénèse proprement dite.

Citation:

Posté par jessy1334

ex: un vecteur binaire, si on lui retire sa région VIR, devient vecteur désarmé

Oui. Par ex., le plasmide Ti d'Agrobacterium tumefaciens est utilisé comme vecteur mais avant il doit être désarmé, on lui retire sa région "vir" pour lui oter son pouvoir pathogène.

jessy1334 · 28/06/2005, 13h56

c'est justement sur ce point qu'il a probleme

pTi désarmé possede une region vir, c'est la partie de l'ADNt codant pour les oncogène qui est enlevé.

c'est surtout sur la terminologie que j'ai un souci concernant les vecteurs

Np81 · 29/06/2005, 18h44

Citation:

Posté par jessy1334

c'est justement sur ce point qu'il a probleme

pTi désarmé possede une region vir, c'est la partie de l'ADNt codant pour les oncogène qui est enlevé.

c'est surtout sur la terminologie que j'ai un souci concernant les vecteurs

Oui tu as raison, je me suis trompé, j'ai la mémoire qui flanche...

En fait (après vérif.), le plasmide Ti utilisé comme vecteur de transformation est bien désarmé parce qu'on lui a enlevé les oncogènes responsables de la galle situés dans la partie qu'on appelle ADN-T (pour ADN de transfert car c'est cette partie qui est transférée dans l'adn de cellules végétales et qui provequera une tumeur). Seules sont conservées les séquences bordantes de l'ADN T, indispensables pour le transfert, qui encadrent la construction génétique que l'on souhaite intégrer dans la plante (un gène d'intérêt accompagné généralement d'un (ou de) gènes permettant la sélection des cellules transformées). Sur ce plasmide Ti existe également cette fameuse région "vir" (pour virulence) qui joue un rôle dans le mécanisme de transfert de l'ADN-T et qui doit bien rester présente pour que ça marche...
Est-ce plus clair ?

jessy1334 · 01/07/2005, 10h34

oui oui
merci