Technique : RFLP

[delirium539]

Salut à tous !

je suis en stage en ce moment dans un labo, et on étudie des champignons.
Après avoir extrait l'ADN de ces champignons, on va faire une RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) sur l'ADN extrait.
Quel est le but de cette manipulation ?
Est-il tout simplement de montrer que si l'on a des profils de migration différents, cela signifife que l'on étudie des champignons différents, ou que si les profils de migration sont identiques, on étudie des champignons qui proviennent d'une même souche?
Je n'ai encore jamais fait ce genre de manip, donc si quelqu'un pouvait m'éclairer sur ce point...

Merci et à+

[Vinc]

Salut!
Voici quelques liens (en anglais) qui vont certainement t'aider à trouver des éléments de réponses:

http://users.rcn.com/jkimball.ma.ult...s/R/RFLPs.html

http://www.biyoturk.com/grup_rflp.htm

A+
Vinc

[delirium539]

Merci pour les liens.
Si toutefois quelqu'un se sent capable de me faire un petit briefing sur le sujet, n'hésitez pas.

Encore merci et à+

[ninam]

Et bien, le RFLP, ca permet aussi de testé l'action de chaque enzyme de restriction, et est utilisé lors de la realisation de l'empreinte genetique...

[ggpessoa]

L'objectif de la RFLP (Restriction FRagment Lenght Polymorphism pour Polymorphisme de longueur des fragments de restriction) est de mettre en évidence des variances alléliques.

Je trouve assez inquiétant que dans le cadre de ton stage, tu ne saches pas pour quelles raisons tu fais des RFLP. Tu dois impérativement voir cela avec les membres de l'équipe. Mais peut-être ai-je mal compris ta question. Si ce sont des informations sur la technique ou le principe (ne pas confondre but et principe !!) de la méthode que tu cherches n'hésites pas à préciser ta question.

[delirium539]

En effet tu as mal compris la question, et si ça peut te rassurer, je suis très bien encadré, et je souhaite même à tous les stagiaires d'être aussi bein encadrer que moi!
Ce que je voulais savoir, c'était le principe de la RFLP, car je n'en avais encore jamais faite et je n'en voyais pas vraiment l'intérêt dans le cadre de notre projet (faut dire que je n'en avais pas encore parlé avec ma maître de stage).
Je commence mes RFLP lundi.
Merci pour les réponses
@+

[ggpessoa]

Le principe est de mettre en évidence un polymorphisme de sites de restriction sur différents brins d'ADN d'un même locus afin de les comparer et d'en conclure à l'existence d'un seul ou de plusieurs allèles.
Si le fragment possède un site de restriction X, il est clivé en ce point (par l'enz. de restriction correspondante) et il y aura migration de fragments plus courts que si ce site de restriction est absent (mutation?).

La technique :
1. ADN + enzyme de restriction
2. Migration sur gel
3. transfert sur membrane
4. Sonde spécifique de la région étudiée

[ggpessoa]

NB : Le fragment obtenu peut aussi être plus ou moins long parce qu'entre deux sites de restriction il y a un microsatellite.

[delirium539]

Merci pour ces réponses!
@+

[Pioute59]

Bonsoir, je suis entrain de voir egalement la techinque sur les RFLP, et tes quelques phrases ((avec des mots censés) m'ont permises de comprendre davantage, toutefois, un détail me chagrine encore :
tu as dis précédemment que l'adn était coupé en point x (car site de restriction) et cela donnait des fragments. Soit, mets tu dis que s'il y a absence de ce site alors il y a migration de fragments plus courts ? ce ne serait pas le contraire par hasard, car si présence de site de restriction alors ca coupe donc longueur moindre que s'il n'y avait pas de site....
enfin, tu vois où je veux en venir j'espère

[delirium539]

Salut,

je pense comme toi, s'il y a présence de sites de restriction, les fragments obtenus seront plus courts que si les sites sont absents, puisque s'il n'y a aucun site de restriction spécifique à l'enzyme de restriction, le fragment reste entier et donc sa longueur est maximale...

[Pioute59]

il n'y a donc plus qu'à attendre la réponse d'un sage