L'extraction d'ADN génomique et transformation de levure

neferesis · 21/12/2005, 19h22

Bonsoir, je suis en master pro et je recherche le rôle de certain tampons présents lors de l'extraction d'ADN génomque et lors de la transformation de S.cerevisiae
Merci d'avance

Djelaba · 21/12/2005, 20h49

Euh bah quel tampon ?
Perso je connais l'extraction avec du phénol, dans un tampon neutre :
- broyage des cellules.
- Centrifugation : Acides nucléiques dans la phase aqueuse (au dessus) et protéines dans la phase phénolique

Je connais également l'extraction/purif d'ADN grâce à l'isothiocyanate de guanidinium puis adsorption sur silice.
- Broyage avec l'isothiocyanate de guanidinium (puissant dénaturant de protéines) passage sur une couche de silice. On force l'ADN (chargé - ) à se fixer sur la silice grace une forte force ionique ( forte concentration na+ )
Les arn et les protéines dénaturées lysées (on fait agir une protéase pour éviter que les nucléases ne détériorent ton ADN) sont récupérés dans une première fraction, on élue ensuite l'adn en diminuant la force ionique.

**Yoyo** · 21/12/2005, 20h56

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Posté par neferesis

Bonsoir, je suis en master pro et je recherche le rôle de certain tampons présents lors de l'extraction d'ADN génomque et lors de la transformation de S.cerevisiae
Merci d'avance

Le mieux serait en effet de nous indiquer quel(s) tampon(s) car y'a a peu pres autant de methodes que de labo

Yoyo

neferesis · 22/12/2005, 09h17

Alors j'ai du PEG (complexant des molécules H2O je crois) Mais je vois pas trop à quoi ça sert dans la transformation de cellules, de l'acétate de lithium (pour créer des pores?) et de l'ADN de sperle de Hrang dénaturé (là je vois pas...) tout ça c'est pour le protocole de trasnfo. Sinon dans un tampon général pour l'extraction d'ADN, j'ai du TritonX-100 je sais que dans certain cas d'immunocytochimie c'est pour éviter que les molécules d'eau s'adsorbent sur une surface en verre mais là...

**Yoyo** · 22/12/2005, 10h06

Salut

Le PEG permet de destabiliser les lipides a la surface des cellules, il est aussi souvent utiliser pour faire fusionner les cellules.
Le LiAc est en effet utilisé pour perméabiliser la membrane des levures
L'ADN de sperme de hareng (ou saumon) est un "ADN carrier" c'est a dire qu'il va servir d'entraineur a ton propre ADN, servant principalement a le protéger des nucleases.
Pour le Triton X-100 c'est un detergeant non ionique.

YOyo

neferesis · 24/12/2005, 13h40

Merci beaucoup et Joyeuses Fêtes de fin d'année