calcul de concentration

[MGT]

Salut
je souhaiterai savoir comment calculer la concentration en protéine (mitochondries) à partir d'une courbe étalon avec la BSA

Merci

[synchrotron]

Salut,

une courbe-étalon c'est l'absorbance en fonction de la concentration. Donc tu mesures l'absorbance de ta solution de protéine et tu détermines la concentration en reportant ta valeur sur la courbe-étalon. Donc tu la détermines graphiquement. Mais attention de faire ta mesure d'absorbance à la même longueur d'onde que ta courbe-étalon a été déterminée. Cela dépend de la méthode de dosage. Sans colorant particulier, les protéines absorbent à 280 nm, avec Bradford, je crois que c'est 540 nm.

[jerome_rennes]

bonjour,

tu fait ta gamme étalon (par ex 0, 5, 10, 20, 30 µg de BSA par tube, volume constant Vx par tube, 100µL en général) .
Pour tes essais, tu prend un volume (5 ou 10µL par ex) que tu complete au Vx avec du PBS, puis tu rajoute partout ton réactif de bradford, et tu laisse agir.
Tu lit la DO sur ton spectro, et tu trace ta droite de la DO en fonction de la quantité de protéine de ta gamme étalon.
Avec l'équation de la droite de régression, tu peux touver la quantité de protéine dans ta prise d'essai (5 ou 10µL) et donc ta concentration.

jerome