cinétique de la B-galactosidase

[Ansofy]

Bonjour,
J'ai un problème concernant un TP de 2ème année de pharmacie, sur la détemination des paramètres cinétiques de la B-galactosidase.
Voici la préparation de la solution:

Solution dONPG (mL) 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,6 0,8 1
Tampon phosphate 2 1,9 1,8 1,7 1,6 1,4 1,2 1

Agiter au Vortex et préchauffer 5min à 30°C

Solution B-gal 1 1 1 1 1 1 1 1

Agiter. Incuber à 30°C pendant 2min exactement mesurés

Solution Na2CO3 1 1 1 1 1 1 1 1

Agiter au Vortex. Lire l'absorbance à 420 nm.

Absorbance 0 0,304 0,6 0,931 1,166 0,994 1,559 1,668

Tracer la courbe obtenue en portant en abscisses la concentration d'ONPG (exprimée en mol/L de milieu réactionnel) et en ordonnées la quantité d'ONP formée par unité de volume de milieu réactionnel et par unité de temps(mM/min).


Je dois obtenir une représentation de Michaelis tendant vers une asymptote correspondant à la vitesse maximale de la réaction; Hors j'obtiens une droite.

Dois-je tenir compte du facteur 4 de dilution si on me demande une concentration par litre de mélange réactionnel?

A quoi correspond la quantité d'ONP formée?

Merci.