[Exercice] Dénaturation et renaturation
Répondre à la discussion
Affichage des résultats 1 à 4 sur 4

Dénaturation et renaturation



  1. #1
    invite5e4e2baa

    Dénaturation et renaturation


    ------

    Bonjour,

    Pourriez vous me corriger mon exercice svp?je ne suis pas sur pour la probabilité


    Une enzyme contient à l’état natif 5 ponts disulfure : (cys4-cys110), (cys14-cys80), (cys20-
    cys42), (cys30-cys92), (cys56-cys146).

    1. La protéine est dénaturée par l’urée 8 mol. L.-1 en présence de β-mercaptoéthanol. Décrire
    le mode d’action de ces deux réactifs.

    2. Dans trois expériences parallèles A, B et C, la protéine dénaturée ci-dessus est :

    A : soumise à une dialyse prolongée permettant d’éliminer totalement et simultanément
    l’urée et le β-mercaptoéthanol.

    B : soumise à une première dialyse prolongée en présence d’urée 8 mol. L. -1
    permettant d’éliminer d’abord le β-mercaptoéthanol, puis à une seconde dialyse prolongée en
    l’absence d’urée.

    C : le protéine obtenue dans l’expérience B est à nouveau soumise à l’action du β-
    mercaptoéthanol, puis dialysée pour éliminer ce réactif.

    Dans les trois cas de figure, l’activité enzymatique de la protéine traitée est mesurée et
    comparée à celle de la protéine native :

    Protéine native Expérience A Expérience B Expérience C
    Activité en % 100 95 0,1 87

    a) Commenter ces résultats.
    b) Calculer la probabilité de reformer les 5 ponts disulfures natifs au cours de l’expérience B,
    en admettant que le réappariement des cystéines en présence d’urée est aléatoire, et que la
    formation d’un pont n’a aucune influence sur la formation des suivants. Cette probabilité
    justifie-t-elle le résultat de l’expérience B ?



    Mon travail :

    1)

    L'urée et le 2 mercapto sont des agents dénaturant chimique.L'urée est utilisé à forte concentration (8 mol.L-1),son action permet de détruire la structure spatiale des protéines.L'urée détourne les liaisons hydrogènes à son profit.La chaine polypeptidique est intacte mais n'est plus structuré : la protéine est dénaturé (phénomene reversible)

    Le 2 mercapto agit au niveau des ponts disulfures.Il clive les liaisons disulfures ce qui perturbe la structure tertiaire et quaternaire des protéines.Il y a réduction des cysteines par le 2 mercapto.

    2) a)

    A: la protéine est soumise à une dialyse permettant d'éliminer totalement et simultanément l'Urée et le 2 mercapto.La protéine de référence est active à 100% et celle qui subit l'expérience A est active à 95%.La quasi totale activité de la protéine est due à la renaturation spontané de la protéine.

    B :la proteine est active à 0,1% car on a ré-oxydé la protéine ce qui a permis aux ponts disulfures de se reformer mais l'urée 8M est toujours présente alors la chaine polypeptidique sera déroulée d'où la perte de sa structure quaternaire et de son activation.Après avec dialyse de l'urée,on dit que la protéine est brouillée

    C : la protéine est active à 87 %.En effet si l'on ajoute du 2 mercapto à la protéine brouillée,elle peut devenir presque totalement active.Cette expérience catalysera des réactions de réarrangement des ponts disulfures.La protéine doit être soumise au 2 mercapto pendant une longue période (10h)

    b)

    La renaturation de la proteine nécessite que ses 5 ponts disulfures se reforment.La probabilité pour qu'un des 10 résidus Cys de la proteine reforme un pont disulfure au hasard avec son vrai partenaire parmi les 9 autres résidus Cys est de 1/9
    Celle d'un des 8 résidus restant de se reformer au hasard son pont disulfure est de 1/7...

    D'où :

    1/9 x 1/7 x 1/5 x 1/3 x 1/1 = 1/945 = 0,001%


    Voila

    -----

  2. #2
    invite5e4e2baa

    Re : Dénaturation et renaturation

    Pourriez vous m'aider svp?

    merci

  3. #3
    Moumoutte

    Re : Dénaturation et renaturation

    Bonjour,

    lorsque vous regardez le positionnement des ponts disulfures, vous vous apercevez qu'ils lient des cystéines assez éloignées les unes des autres (et pas à la cystéine voisine). Par conséquent, il faut que la protéine se replie spatialement avant afin d'avoir les ponts disulfures corrects.
    C'est ce que vous indique les trois expériences:
    A - Lorsque l'on enlève les deux agents simultanément la protéine se reforme quasi normalement et l'activité n'en est presque pas changée.
    B - Lorsque par contre on enlève l'agent réducteur (pour pouvoir reformer les ponts disulfures) en premier sans permettre à la protéine de se replier dans l'espace (sans enlever l'urée) la protéine ne forme pas les bons ponts disulfures. Par conséquent, même en enlevant ensuite l'urée, les ponts disulfures déjà formés empêchent la protéine de se replier normalement et cette dernière ne retrouve pas sa conformation initiale: l'activité est fortement altérée.
    C- Par contre, si l'on re-casse ces ponts disulfures en laissant la protéine formée dans l'espace, ces derniers peuvent mieux se ré-assembler et l'activité ré-augmente.

    Concernant le calcul des probabilités, je ne maitrise pas trop ce genre d'exercice. Mais votre calcul me semble cohérent.

    +

  4. #4
    invite5e4e2baa

    Re : Dénaturation et renaturation

    Merci beaucoup

  5. A voir en vidéo sur Futura

Discussions similaires

  1. [Biochimie] Hybridation / renaturation
    Par Simedecine dans le forum Biologie
    Réponses: 1
    Dernier message: 28/11/2016, 18h48
  2. différence dénaturation protéine et dénaturation enzyme
    Par cookiemiam dans le forum Biologie
    Réponses: 5
    Dernier message: 14/04/2014, 21h09
  3. [Biologie Moléculaire] Cinétique de la renaturation de l'ADN
    Par invite41cff720 dans le forum Biologie
    Réponses: 2
    Dernier message: 17/07/2011, 15h46
  4. Renaturation de corps d'inclusion
    Par inviteec077029 dans le forum Biologie
    Réponses: 0
    Dernier message: 20/06/2007, 19h27
Découvrez nos comparatifs produits sur le sport et la santé : thermomètre médical, soins personnels...