Coloration de Gram

[invite856a7819]

Salut,J'aurais voulu savoir si quelqu'un conaissait le processus exact pour faire une coloration de gram?
Merci d'avance
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[invite66cc5608]

1: coloration au violet de gentiane et au lugol( pour le mordancage)
2decoloration a l'alcool-acétone(pas trop longtemps !!!!!)
3bien reincer a l'eau
4faire une contre coloration a la safranine.

les Grams+ sont bleus ( du a leurs acides teichoïques lipoteichoïques et teïchuroniques se trouvant dans leur parois et qui sont imperméable à l'alcool)et
les Grams - sont rouges car ne possèdent pas ces acides)

[inviteec955545]

Salut,
déjà avant tout, tu déposes une petite quantité de tes bactéries sur lame, et surtout tu les fixes, sinon au premier lavage il n'y aura plus rien (en général la fixation se fait en passant la lame sur une flamme).

Ensuite tu fais une coloration au cristal violet, ou violet de gentiane, en déposant une grosse goutte sur ta lame. Tu laisses agir, le temps varie selon les protocoles, dans celui que j'utilisais c'était une trentaine de seconde. Puis tu rinces sous un mince filet d'eau.
A ce stade toutes tes bactéries sont violettes

Puis mordançage au lugol, même chose (laisser agir 30 sec puis rinçage)

Puis décoloration à l'alcool, pas trop longtemps qu'il faut laisser agir, là!

A ce stade, les Gram+ sont toujours violettes, mais les Gram- sont décolorées.

Donc pour pouvoir les observer, il faut les recolorer légèrement, en général à la fuchsine ou safranine (je ne sais plus l'avantage de l'un par rapport à l'autre, mais c'est à peu près kif-kif.

Après tes Gram+ sont violettes foncé, et tes Gram- sont plutôt rosées... mais desfois les rosées sont rose foncé et ce n'est pas forcément très facile à différencier

En esperant ne pas avoir répété des choses qui ont peut-être été trop souvent dites

CARO666

[invite856a7819]

Merci beaucoup !!

[A voir en vidéo sur Futura]

[zimzum18]

il faut aussi fixer à l'alcool pendant 5 minutes avant de mettre les colorants

[invite2af3de2b]

Est-ce que quelqu'un pourrait me dire si la contre coloration à la safranine est indispensable dans la distinction entre les Gram + et - ?

[invitee8b3f97e]

Salut !

La dernière étape de coloratin (fuschine ou safranine) est effectivement obligatoire, car sinon les bactéries gram- sont transparentes.