[biologie moléculaire] Opéron lactose

[liliadoc]

bonsoir a tous le monde
si quelqu'un peut me dire qu'il est la differance entre un lacZ et lacZ' ?je serai trés reconnaissante
merci d'avance
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[Yoyo]

salut

tu pourrais préciser le contexte de ta question stp? car la franchement ca veut pas dire grand chose...
LacZ codant pour une proteine (beta-galactosidase) mais a part ca...

YOyo

[liliadoc]

Bonjour à tous,
merci de m'avoir répondu YOYO,dans des article je trouve qui parle du lacZ comme étant le gène qui code pour le béta gal.Le lacZ n'est exprimé q'en présence de lactose.En experimentation on ajoute IPTG qui induit a la transcription du lac Z en Béta gal mais qui est inactive.Donc pour qu'elle soit active on introduit un phage par exp M13 qui porte le géne lacZ' qui code pour une peptide alpha qui se lie a la partie inactive omaga pour avoir une béta galactosidase active.
Donc ma question est si on trouve un lacZ' cela veut dire que c'est toujour un vecteur??et quelle la difference entre un opéron lactose lacI et laci dans l'expression du lacZ??
merci infiniment pour vos réponse
amicalement

[Fainaew]

Généralement, quand on écrit lacZ', c'est que le gène a été tronqué en 5'. Par exemple, si on introduit un insert quelconque (X) au sein de ce gène tu trouveras écrit :

lacZ' X 'lacZ
----+-+-------

Cela signifie que le gène codé par ton vecteur est incomplet et peut être utilisé (si je ne me trompe pas) pour faire de l'alpha complémentation.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite58eb9a9d]

salut ,je suis désolée mais quelqu'un peut m'expliquer tout ça?!je ne connait pas un gene qui s'appelle lacZ',et je demonde pourquoi on doit utuliser IPTG pour provoquer_ meme experimentalement- l'expression du gene lacZ qui vas donner une protéine inactif qui sera besoin d'un complimentair
merci d'avance

[Squalor]

salut!

L'IPTG est utilisée notement en biotechnologie dans les cas de productions de protéines recombinantes par un vecteur d'expression que l'on fabriquera avec un gène d'une "protéine fusion" (le gène lacZ ds ce cas ci) qui permettra une lecture du gène controlée et donc une production controlée de la protéine cible.

C'est interressant car cela permet d'optimiser la production de la protéine recombinante en commencant la production apres une période de développement et de division de l'organisme hote.

amicalement,

greg

[invitee8b3f97e]

Salut !

Je ne suis pas bien sur d'avoir compris toute la questiion, mais on va essayer de décomposer les étapes.

Dans un vecteur de clonage, on trouve un gène LacZ qui produit la béta galactosidase. En présence de X-gal, la béta-galactosidase produit un composé de couleur bleue. Pour que cette coloration soit active, il faut que le gène de LacZ soit intact. Or le site de clonage du fragment se trouve en général au milieu du gène LacZ : si le clonage est réussi, la béta-galactosidase est incomplète, et donc la coloration ne se fait pas.

C'est là que je ne suis pas sur, mais il me semble que dans certains vecteurs d'expression, le gène LacZ est placé sous le contrôlé d'un promoteur. Ce promoteur nécessite de l'IPTG pour s'activer.

Donc dans l'ordre, tu clones ton gène recombinant dans ton vecteur, tu transformes une cellule de E. coli avec ton vecteur, tu la fait pousser sur un milieu contenant un antibiotique, du X-gal et de l'IPTG. Si la colonie devient bleue, c'est que le vecteur se trouve dans la cellule, mais que le gène LacZ est intact, donc l'insertion du gène recombinant n'a pas fonctionné. Si la colonie reste blanche, c'est que la bétagalactosidase est tronquée, et donc que l'insertion s'est faite correctement.

[invite58eb9a9d]

bonjour,
merci pour les explications,alors lorsqu'on fait le clonnage dans le vecteur bleusxprit(cotennent le gene lacZ)il faut ajouté de l'IPTG (qui est un inducteur non metabolisable de l'opéron lactose)ce dernier induit la formation du beta galoctosidase,
ensuite lors de la sélection des clones recombinantes(les bacteries ayant incorporé un vecteur recombinant)on ajoute autre que l'antibiotiqe ,de l'x-gal (incolore)qui vas etre cliver par le beta galogtosidase toute en produisant une coloration bleue ,donc l'obtension de cette coloration indique qu'on est en présence des bacteries trasformeés par un plasmide intact .
mais je serais ravie de savoir c'est quoi le gene lacZ'?
merci

[gorben]

bonjour,
mais je serais ravie de savoir c'est quoi le gene lacZ'?
merci

Salut,

LacZ' c'est un petit bout de lacZ qui va complementer une copie inactive sur le chromosome. Pourquoi un petit bout plutot que le gene entier??? Je dirais que c'est par optimisation. En effet LacZ' ne fais que quelques centaines de pb alors que lacZ fait 3Kb. C'est plus facile de manipuler des courtes sequences que des grosses. De plus, dans un gene de 3Kb tu as plus de chance de te retrouver avec des sites de restrictions non desires.

A+