[biologie moléculaire] Identification d'une molécule

[invite468ec3f9]

Bonsoir à tous,
J'ai un exercice de bio et je suis coincée, si vous voudriez bien venir à mon secours...

J'ai identifié une macromolécule constituée de glycérol, acide gras, phosphate et sérine comme étant hosphatidylsérine.

Pour la suite, cette macromolécule est chauffée en présence de détergents et d'un agent réducteur des ponts disulfures. Le mélange est séparé par élctrophorèse et visualisé à l'aide d'un colorant spécifique. Quelles sont les macromolécules visibles par cette technique et quels leurs éléments constitutifs?

Je ne sais pas grand chose sur les ponts disulfure et sur l'effet des détergents sur les lipides. Merci de me guider
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[inviteae5af7c0]

Quand on utilise un détergeant, comme l'urée ou le SDS par exemple, toute la structure II, III voir IV de ta macromolécule va être détruite car tu vire toute les liaisons, qui forment son architecture. De même en augmentant la température ou en mettant un agent réducteur de ponts disulfures, l'effet de dénaturation sera augmenté.

Tu va donc retrouver tes proteines sous formes linéaires, elles vont migrer, tu colore, et chaque bandes que tu observera sur ton gel d'électrophorèse sera en fait une proteine, constituant ta macromolécule d'origine.


Normalement, on met aux extrémités du gel d'éléctrophorèse des marqueurs de Poids Moléculaires, et tu peux donc estimer la Masse Moléculaire de chaque proteine. Cela t'aidera dans l'identification de chaque proteine. Voila

[invite468ec3f9]

Je n'ai pas compris pourquoi tu évoques des protéines car au départ je n'en ai pas

[invite5351d78c]

Il a raison de parler de protéine car les expériences qui ont été faites après l'identification de la phosphatidylsérine sont typiques d'une analyse de protéine. En effet, s'il n'y avait que des lipides, où serait l'intérêt de traiter avec un agent réducteur des ponts disulfures et de faire migrer sur électrophorèse??

Je met (presque ) ma main a coupé que la molécule étudiée ici est une protéine qui a été modifiée post-traductionnellement avec ajout d'une phosphatidylsérine ce qui permet à la protéine d'être en périphérie de la membrane, côté cytosol. Ou alors c'est un ajout d'un glycérophosphate sur une sérine de la protéine (je pencherais plutôt sur ça ).

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite468ec3f9]

Donc,
je dois dire que les macromolécules visibles sur éléctrophorèse sont des protéines.

Mais est ce que suis sensée être capable de les identifier plus précisément ?

jE dois détailler les éléments constitutifs de ces macromolécules et je ne sais pas quel est l'effet précisément des réactions subies. Quelles sont les liaisons détruites ? Au départ j'ai la molécule de phosphatidylsérine, doù dois je savoir comment elle est divisée.

Merci de m'éclairer

[inviteae5af7c0]

euh...les molécules du vivant comme l' ADN ou les protéines sont des macromolécules.

Les agents réducteurs de ponts dissulfures (SS) vont virés tous les pt SS, et à mon avis, les autres liaisons hydrophobes, ioniques, hydrogènes, ou de van der walls vont y passé aussi vu que tu chauffe et que tu as mis un détergeant.

Pour l'identification, regarde si on te donne une échelle de PM ce qui te permettrais de "lire" le PM de chaque proteine en fonction de la distance de migration. Souvent, le 1er et le dernier puit servent à cela.

[invite15478df7]

Bonjour,

J'ai vu que tu étais dans le même cursus que moi... en cours par correspondance. Et donc, nous avons les mêmes devoirs.
Je ne sais pas si tu as trouvé depuis lors la réponse à ta question. Mais je pense que la question porte sur "toutes" les macromolécules présentent dans la membrane plasmique p.55. (La phosphatidylsérine en fait partie). On a chauffé tout le culot (dans la question: "parallèlement") et pas que la macromolécule que l'on a isolé en question 4.

Bon courage
nat