problèmes gels SDS PAGE
Bonsoir à tous,
J'ai actuellement un petit problème avec mes gels SDS PAGE, ils sont très moches même le marqueur moléculaire ! on ne voit rien surtout au niveau des PM élevés là où je devrai voir ma protéine! Est-ce que quelqu'un peut me donner un protocole détaillé : gel de concentration à environ 3,5% , gel de séparation à 8%, traitement des échantillons... ou bien me diriger vers un lien ???
Merci d'avance.
PS: le PM de ma protéine est d'environ 98 kDa.
Salut!
Si ton problème est uniquement pour le shauts poids moléculaires, peut-être peux tu essayer un 6%. Mais si tu as déjà vu ta bande avec un 8% alors c'est un autre problème! Si tu as fait plusieurs gels et que ça n'a pas fonctionné, mon conseil (ca m'est arrivé un certain nombre de fois):
- reprend le pH de tous tes buffers mais refais les de toute façon
- refais toutes tes sauces (SDS, etc...)
- prend de l'acrylamide neuf
- refais ton APS
- refais tes buffers de migration!!!!!! (moi ça venait de là)
Qu'est ce que tu utilises comme marqueurs?? Est ce que la bas du marqueur est joli ou c'est simplement le haut???
Ce genre de problème est très bête mais peut faire perdre un temps fou donc je te conseille de re-tester chaque élément pour voir ce qui ne va pas : il faut être très méthodique et ne pas hésiter à écrire les combinaisons à tester pour ne pas s'embrouiller.
Voili voilou!
Bon courage!
A+
Vinc
Primum non nocere.
Salut,
Meme reponse que Vinc !
Perso je n'utilise QUE de l'APS "du jour" j'ai eu trop de problemes avec de l'APS congele.
A+
Tester methodiquement chaque elements?
Franchement là je ne suis pas d'accord. Quand ca ne marche pas, je change toutes les sauces et on recommence avec du mathos neuf. Pas de temps à perdre à comprendre si c'est le SDS qui ne va pas ou l'acrylamide. En changeant tout, le lendemain on est sur de nouvelles bases et l'on ne perd pas de temps.
C'est ma méthode en tout cas.
Cordialement,
piwi
Oui sauf que quelquefois (et c'était mon cas), ça ne remarchait pas même en refaisant toutes les sauces parce qu'elles utilisaient des éléments de stock et c'étaient eux qui posaient problème.... Donc on ets d'accord (et c'est ce que je dis) : tu commences par refaire toutes tes sauces mais si ça ne fonctionne toujours pas, il faut reprendre chaque sauce refaite individuellement pout identifier le stock qui bloque.... Je m'étais assez mal exprimé.
A+
Vinc
Primum non nocere.
merci à vous, j'ai déjà tout refait et effectivement le problème vient peut etre du tampon de migration car les gels ont commencé à ne plus etre beau lorsque j'ai utilisé un tampon commercial!
je teste mon nouveau gel avec son nouveau tampon aujourd'hui et je vous tiens au courant!
merci !
Re : problèmes gels SDS PAGE
ça marche j'ai un super gel et je pense que c'était le tampon de migration!
Merci beaucoup!
A+
