Protéine recombinante, promoteurs du vecteur d'expression

[zendub]

Bonjour à vous, j'ai des questions concernant le choix d'un promoteur lors de la synthèse de protéines recombinantes.

1/ Je voulais savoir quel était le role du gène bactérien placé entre le promoteur et la séquence d'ADNc ?

2/ On choisit un promoteur inductible. Si j'ai bien compris son interet est de pouvoir réguler la synthèse de la protéine en fonction de l'activité de la bactérie. Par exemple si la protéine synthétisé est toxique pour la bactérie on va chercher à ne pas la produire lors de la phase de multiplication bactérienne et lancer la "production" lors de la phase "stationnaire".
Est-ce bien cela ?

Merci avant tout de votre aide
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[Jean-Luc P]

1/ Je voulais savoir quel était le role du gène bactérien placé entre le promoteur et la séquence d'ADNc ?

Bonjour,

ce ne serait pas par hasard une séquence destinée à la purification de la protéine comme une GST par exemple ?

2/ On choisit un promoteur inductible. Si j'ai bien compris son interet est de pouvoir réguler la synthèse de la protéine en fonction de l'activité de la bactérie. Par exemple si la protéine synthétisé est toxique pour la bactérie on va chercher à ne pas la produire lors de la phase de multiplication bactérienne et lancer la "production" lors de la phase "stationnaire".
Est-ce bien cela ?

C'est l'idée, oui.
Et même si ce n'est pas toxique, il vaut mieux induire à la fin, on a de meileurs rendements car la pousse n'est pas ralentie à cause d'une protéine surproduite et une meilleure gestion des nutriments.

[zendub]

hum concernant le gène bactérien il est écrit :

"facilité l'initiation et empèche de mettre une séquence RBS"

[LXR]

Salut,

pour ce qui est de l'induction, il vaut mieux la faire juste avant la phase stationnaire car une fois passé ce cap, les bactéries s'isole de leur environnement en quelque sorte, en diminuant considérablement le nombre de pores membranaires. Donc la molécule inductrice ne peut plus traverser la membrane (peut-être que des molécules hydrophobes pourrait passer par diffusion passive.. ), donc plus de possibilité d'induire la production de la protéine.

Pour ton gène bactérien, peut-être que c'est une séquence de type IRES, comme on les retrouve chez les eucaryotes, mais je ne sais pas si c'est valable pour les procaryotes... Il me semble mais je n'en suis pas sûr, je ne veux pas t'induire en erreur.

J'espère t'avoir un peu éclairé.

Greg

[A voir en vidéo sur Futura]