cinétique enzymatique

[marmotte412]

Bonjour, j'ai un petit souci avec une question de mon DM : étude cinétique de l'invertase.
1. influence de la concentration en enzyme : j'ai tracé la courbe P=f(t) pour chaque concentration, j'ai dédui des courbes les vi (tangente à l'origine c'est bien cela ?) et j'ai tracé la courbe vi = f(Ce) que j'ai aussi interprété.
Ensuite, on me dit : sachant que la masse molaire de l'enzyme est de 250 000 g/mol, calculer l'activité spécifique de l'enzyme. Comment faut-il procédé ? merci d'avance

2. Influence de la concentration en substrat : j'ai tracé la courbe 1/vi = f(1/S), j'ai dédui graphiquement Vmax et Km. on me demande alors quelle est l'activité de 1mL de la solution de l'enzyme utilisée, et de déterminer la concentration molaire de la solution d'enzyme utilisée ; merci de me donner quelques indications pour faire ces calculs

[marmotte412]

aidez-moi s'il-vous-plaît !!!

[piwi]

Cette adresse vous sera sans doute d'un grand secour en remettant les choses à plat:
http://www2.univ-reunion.fr/~dbbm/CY...niteenzyme.htm

Cordialement,
piwi

[marmotte412]

J'ai bien lu tout ce qu'il y avait, le problème c'est que je ne vois pas comment se servir des courbes tracées précédemment ! je pense qu'il faut les utilisées, sinon pourquoi nous les avoir fait tracées !!!!
merci

[daloula]

salut ,
tu peut écrire tout l'exercice stp,parce que j'ai déjà pratiquée plusieurs exercices de ce type et je vais essayer de te répondre ok

[piwi]

Bonsoir,

Vi c'est quoi? C'est bien la quantité de substrat transformé par unité de temps.
Si les quantitées de substrats et d'enzymes sont exprimées en molarité alors Le nombre de moles de substrat transformées par moles d'enzymes par minutes est l'activité molaire de l'enzyme que l'on peut convertir en activité spécifique grace à la masse molaire de l'enzyme.
Question, l'activité de l'enzyme change elle avec la concentration?

Dans la seconde question on te demande quelle est l'activité de l'enzyme.
Tu as déjà calculé l'activité molaire en question 1. AM=Kcat*60.
De là tu tires Kcat et Kcat=Vmax/[E]

Et voilou,
Cordialement,
piwi

[marmotte412]

Exercice 13
L’invertase catalyse la réactiond’hydrolyse du saccharose :
Saccharose + H2O « Glucose + Fructose
a) On veut déterminer l’influence de la concentration en enzyme sur la vitesse de la réaction: on ajoute à un mélange comprenant 1 ml de tampon pH 7,0 et 1 ml de substrat à concentration saturante , 1ml de solution d’invertase pure de concentration variable. On mesure la concentration de produit (glucose) apparu en fonction du temps :


[E]o (10 – 6M) [Glucose]mole)
temps (min)
2,5 5 7,5 10 12,5 15 17,5 20
1 0,8 1,5 2,5 3,3 4,1 5,0 5,8 6,6
3 2,9 5,8 8,7 11,5 14,4 16,8 18,4 19,5
5,6 5,0 10,0 15,0 17,8 19,5 21,0 21,7 22,0

1) Tracez les courbes P = f(t) et commentez-les.
2) Calculez les vitesses initiales vi exprimées en moles de glucose apparues par min pour chaque concentration d’enzyme. Tracez la courbe vi = f(E) et donnez vos interprétations des résultats.
3) Calculez son activité spécifique sachant que sa masse molaire est de 250 000 g/mole.

b) On veut déterminer l’influence de la concentration en substrat sur la vitesse de la réaction : on ajoute à un mélange comprenant 1 ml de tampon pH 7,0 et 1 ml d’invertase de concentration identique , 1 ml de solution de saccharose de concentration variable. On mesure la vitesse initiale de la réaction pour les différentes concentrations de substrat :

tableau de données (concentration et vitesses)


1) Tracez la courbe vi = f(S) . Commentez cette courbe et déterminez à l’aide d’une représentation fiable Vm et Km.
2) Quelle est l’activité de 1 ml de la solution d’invertase ?
3) Déterminez la concentration molaire de cette solution.

lien : biologie.univ-mrs.fr/upload/p79/TDenzymoBioch2007_2008.doc
voilà merci d'avance

[marmotte412]

pour l'activité spécifique du 1, je trouve 10 puissance - 3 cela est-il possible ?? dans la norme quoi !!

[marmotte412]

help svp !!!!!!!!!

[daloula]

salut,
le tableau est mal réaliser
1)pour l'interprétation de la courbe p=f(t) on doit trouver une courbe exponentielle qui comporte une partie initial quasi rectiligne ou la pente c'est à dire vi est une constante puis elle s'infléchit ,donc la pente diminue pour finalement s'annuler quand tout le substrat a été transformée(ou quand l'equilibre est atteint S___P est réversible );dans la partie initial quasi linéaire ,on peut écrire :
vi=-d[S]/dt=d[P]/dt
pour avoir vi tu doit tracer la tangente de la partie linéaire passant par l'origine et ensuite de faire la pente (je suppose que tu peut le faire )
2)pour les valeurs trouver de vi pour les différentes concentrations des enzymes yu trace la courbe de vi=f(E)tu doit trouver une courbe rectiligne qui indique une proportionnalité entre la valeur de [E]et ceux de vi
3)l'ativitée spésifique d'une ppréparation enzymatique (AS)est exprimée en UI*mg de E(nombre en mole de produit former ou de substrat transformer par minute par mg d'enzyme )
on sait que la valeur de vi correspond à la UI(activité de l'enzyme)
aussi que d'après les donnés 250000g correspond à 1 mole alors c'est clair maintenant tu doit juste faire un simple calcule (une simple application de règle de trois )"n'oublie pas les unités "
b)1)dans ce cas on a la concentration de l'enzyme est constante ,c'est une représentation de la variation de la vitesse initiale en fonction de la concentration en substrat vi=f([S]qui correspond à la representation de michaelis et menten ,
la courbe obtenue est une courbe hyperbolique :la vitesse initiale tend asymptotiquement vers vmax pour des concentration croissantes de S
2) la reprèsentation de Michaelis et Menten ne donne pas des valeurs fiable et precise de vmax et km(les paramètres cinétique )pour contourner ce probléme on fait la représentation de Lineweaver et Burk ou appelé aussi repr2sentation de double inverse 1/Vi=1/[S]
3)l'activité de 1 ml correspond à la valeur de Vmax ,
désolée je dois partir ,je continuera après si t'a des questions c'est le temps à les poser

[marmotte412]

je te remercie pour toutes ces précisions, je vais refaire cet exercice et voir s'il me manque des explications ! merci beaucoup

[marmotte412]

Donc alors pour la question du début et la proportionnalité j'ai trouvé 10-3/250000 = 4.10-9 micromole de saccharose hydrolysé/min/mg d'enzyme.
Par contre, je ne vois pas très bien pourquoi 1ml correspond à la valeur de Vmax ?? est-ce toujours le cas (autres exercices etc)?
Enfin, désolé avec mes questions, pour déterminer la concentration molaire, dois-je utiliser l'activité spécifique de l'enzyme calculée dans la 1ère partie ?
merci d'avance

[marmotte412]

daloula peut-il ou peut-elle encore m'aidé ? ?

[daloula]

salut ,
je vais essayer de faire l'exercice "avec traçage des courbes et avec des calcules précises et pour etre sur des resultats je vais consultée mon professeur de biochimie (juste pour etre sur ok)