Bonjour,
J'aurais une petite question concernant la culture cellulaire. Auparavant je n'avais fait que des cultures primaires de fibroblastes, et je devais faire attention au nombre de passages de mes cellules.
Qu'en est-il pour les lignées? Peut-on les cultiver "indéfiniment"?... Merci d'avance pour vos réponses!
Bonsoir!
Oui c'est le principe d'une lignée à savoir qu'elle est immortelle et que l'on travaille à un nombre de passages très élevé.
Et il faut donc se rendre compte que lorsque l'on décongèle des cellules et que l'on écrit p1 sur la boite (ou p0 pour les psychorigides dont je fais partie...), les cellules n'en sont pas à leur premier passage et le fait de congeler puis de décongeler ne change rien. Autrement dit on ne sait absolument pas à quel passage réel sont les lignées que l'on manipule. Pour autant, nous sommes nombreux à utiliser une "notation de remise à zéro des passages" après chaque décongélation simplement parce que c'est beaucoup plus simple.
Et enfin il s'avère qu'après une dizaine ou une quinzaine de passage (pour certaines cellules), quelques propriétés sont sujettes à variation comme la capacité de transfection par exemple. Ce qui montre que le fait de décongeler des cellules fraîches a une influence, malgrès le fait que le nombre de passage ne revienne pas en arrière....
V.
Primum non nocere.
Merci... Et concernant les cellules non adhérentes?
Peut-on parler de passages aussi puisqu'on ne les trypsine pas, on les dilue juste avec du milieu neuf ?...
Le passage n'est pas tant le fait de trypsiner que le fait de comptabiliser les générations...
V.
Primum non nocere.
salut,
je me mèle un peu de votre discussion, j'aimerais savoir à quoi sert il de faire plusieurs lignées, cellulaires, c'est un peu nunuche comme question.
je veux dire excepté le fait qu'on peut refaire notre manipulation plusieurs fois,pourquoi on doit aller jusqu' à 100 passages? par exemple.
merci
Bonjour!
J'ai peur de ne pas comprendre votre question... Pouvez vous préciser s'il vous plait?
V.
Primum non nocere.
Ok, mais donc concrètement sur des cellules non adhérentes, comment je compte les passages.... ?
Et moi non plus je ne comprends pas bien l'autre question... On maintient nos cellules parceque c'est notre outils de travail et qu'il faut bien les maintenir en culture pour pouvoir maintenir la lignée et travailler avec...
salut,
merci pour vos réponses, en fait ma question concernait le nombre de passages, et l'utilité de ce nombre.
en fait, je croyais qu'il fallait obligatoirement aller jusqu'à 100 passages, minimum. est ce que c'est plus compréhensible, maintenant?
merci encore.
Non, pourquoi cette idée qu'on doitaller jusqu'à 100 passages? Au contraire, comme le disait Vince, au bout d'un certain nombre de passages, certaines propriétés des cellules sont suceptibles de changer, sans compter le fait qu' au fur et à mesure, des cellules meurent et qu'on réalise une sorte de clonage ou seules les cellules les plus résistantes persistent... Bref, ce n'esyt pas très bon e mulptiplier le nombre de passages. En attendant, j'attends toujours vos réponses sur le cas des cellules non adhérentes... merci d'avance!
