Anaérobie/stress oxydatif

[gorben]

Salut,

En fait je cherche le moyen de stresser (stress oxydatif) des bacteries.
J'aimerais faire chuter tres rapidement la PO2, et le seul moyen que j'ai trouve c'est de les mettre en jarre et de remplir avec du N2. J'aime pas trop le principe parce que ca rajoute aussi un stress de pression (vider la jarre en premier puis re-remplir) et de temperature (ca se fait pas a 37 degres...) et que ce que j'observe est tres sensible aux changements... Est ce que quelqu'un a une idee pour le faire rapidement? (un compose chimique non toxique ou quelque chose du style?)

De la meme maniere je cherche a augmenter la PO2 (mais surtout a creer un stress oxydatif : O2-, HO...), et la ma seule alternative c'est le H2O2. Le probleme c'est que c'est hyper toxique et que du coup avant de trouver la concentration ideale je vais devoir en tester pas mal. Une autre idee?

Merci
-----

[bam823543]

bonjour,
tu peux essayer avec de la cystéine Hcl, c'est un réducteur puissant,
Tu mets ton milieu sous courant d'azote 1 à 2 min, tu ajoutes la cystéine Hcl (concentration 0.5 g/l), et tu laisse saturer sous courant de co2 pendant 1 heure si tu ne veux plus du tout d'oxygène.
Le NA2S (sodium disulfite) est utilisé aussi pour ce genre de pratique.
si tu as des problèmes de baisse de ph ajoute avant du NaOHCO3 (5g/l) pour tamponer le milieu) et puis tu peux aussi utiliser un indicateur de milieu comme la résazurine (facultatif) qui est rose quand le milieu est oxydé et incolore quand il est réduit.
j'espère que cela t'aidera
bonne journée
Bam

[gorben]

Salut,

Merci pour ta reponse, mais le temps de traitement est trop long. Je recherche plus un moyen de faire chuter la PO2 en max 30 secondes. Plus long le stress ne va pas etre assez brutal, et je ne vais pas pouvoir voir ce qui m'interesse.
Je garde quand meme ces reducteurs en memoires, au cas ou...

A+

[jmbowie]

Plutôt que du H2O2, je te conseille d'utiliser de la mitomycine C (concentration finale vers 1,6 microg/ml, à optimiser en fonction de la dose qui donne le meilleur résultat). La mitomycine C va directement entraîner la formation de cassures double-brins et du coup activer le système SOS via lexA. Tu peux utiliser des antibiotiques aussi, vu qu'ils sont connus pour induire un stress SOS (quinolone, etc.)

[A voir en vidéo sur Futura]

[gorben]

Salut,

J'ai deja utilise la mitomycine C (ainsi que les UV) pour induire la reponse SOS. Maintenant ce que je recherche c'est plutot une reponse specifique "oxydative" (SOD, catalase, oxydase...).
Je cherche pas a les tuer, juste a voir ce qui se passe dans les moments precoces d'une reponse au stress oxydatif (par exemple 5 min apres le stress).

A+

[jmbowie]

Salut,

J'ai deja utilise la mitomycine C (ainsi que les UV) pour induire la reponse SOS. Maintenant ce que je recherche c'est plutot une reponse specifique "oxydative" (SOD, catalase, oxydase...).
Je cherche pas a les tuer, juste a voir ce qui se passe dans les moments precoces d'une reponse au stress oxydatif (par exemple 5 min apres le stress).

A+

et tu n'as rien avec la mitomycine C? Sinon, le H2O2 fonctionne bien avec une faible concentration, et tu peux stopper le processus en rajoutant de la catalase.

[gorben]

et tu n'as rien avec la mitomycine C?

Oh si, j'ai un beau stress

Sinon, le H2O2 fonctionne bien avec une faible concentration, et tu peux stopper le processus en rajoutant de la catalase.

Une idee de la concentration? J'avais vu que la CMI de l'H2O2 etait de l'ordre de 0.004%... c'est plutot faible...

[jmbowie]

Oh si, j'ai un beau stress



Une idee de la concentration? J'avais vu que la CMI de l'H2O2 etait de l'ordre de 0.004%... c'est plutot faible...

Je regarderai cela, je te tiens au jus