[Biologie Moléculaire] T4 ligase

[MagikF]

j'ai un trou de mémoire!

si je religue un fragment SmaI (blunt) avec un f. ApaI 3' sortant avec la T4 DNA ligase; est-ce qu'elle va combler les trous pour avoir une ligation nette????

merci d'avance!

[IngDr]

non, faut religuer Blunt/blunt ou cohesives compatibles.
Sinon on aurait des sacrés problèmes de cadre de lecture si la T4 comblait les "trous" dans une ligation entre extremités cohésives.
En plus, est ce que tu mets des dNTP dans ton tampon de ligation ????

[MagikF]

Envoyé par IngDr

non, faut religuer Blunt/blunt ou cohesives compatibles.
Sinon on aurait des sacrés problèmes de cadre de lecture si la T4 comblait les "trous" dans une ligation entre extremités cohésives.
En plus, est ce que tu mets des dNTP dans ton tampon de ligation ????

Merci!!!

c'est bien ce que je pensais!
je suis bon pour recommander de la klenow que je n'ai plus..........