Culture de fibroblastes équins

[invite4f347bc1]

Bonjour,

Je cherche à mettre en route la culture de fibroblastes équins isolés à partir de cellules tendineuses.
Est-ce que quelqu'un aurait des conseils, articles ou protocoles à me filer afin de m'aider.

Un premier essai a déjà été réalisé en comparant digestion des tendons ou en mettant directement des morceaux de tendon dans les plaques de culture (l'article disait de laisser ces morceaux 1 semaine. Les fibroblastes "migrerait vers la plaque de culture pour y adhérer...)
Les manip sont en cours mais je ne sais pas si ce sera concluant donc toute aide est la bienvenue

D'avance merci pour votre aide
-----

[invite7577fe65]

Bonjour Titia,

Au labo nous faisons de la culture de cellules primaires de tendon de rats, et de souris.

Deux techniques, que si je comprend bien, tu a déjà repéré:
Les explants : Mise en culture de morceaux de tendon dans un milieu adéquat. Les ténocytes devraient sortir à partir de 10 jours, même si durant les premiers jours tu pourrais en voir migrer et adhérer. Le milieu de culture doit contenir de la vitamine C (50mg/l au final)

La digestion : Avec de la collagénase, tu fais digérer les tendons,et après des lavages pour éliminer la collagénase, tu mets en culture les ténocytes qui auront été extraits. Il faut juste trouver la bonne concentration de collagénase. L'avantage avec cette technique, c'est que tu obtiens des cellules de tendons rapidement mais le risque est de flinguer tes cellules si trop de collagénase.

Il y a un papier où ils font ça sur à partir des tendons de mouton. Il utilise la collagénase et la trypsine. Recherche sur pubmed, l'article de Xue "activated protein C mediates a healing phenotype in cultured tenocytes".

Donc pour l'instant, wait and see. Mais les deux techniques que tu viens de tester sont les plus appropriées, mais nécessiteront des adaptations.

[invite4f347bc1]

Merci pour les conseils et pour l'article aussi!
J'ai montré mes plaques à un collègue d'un autre labo et j'ai apparement des fibroblastes mais apparement ils sont trop allongés et j'ai aussi pas mal de cellules rondes qui indiquerait qu'elles sont mortent.
Il m'a dit qu'il pourrait s'agir d'une incompatibilité avec mon lot de sérum. Il me conseille un sérum à taux très bas en endotoxine.
Je refais des essais demain et on verra!