Immunofluorescence

[invite53e9773b]

Bonjour,
pour mettre en évidence une protéine qui s'exprime à la fois dans le noyau et le cytoplasme, on doit utiliser en même temps des anticorps fluorescents et des intercalants de bases?

Merci
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[piwi]

J'imagine que votre question est pourquoi le fait on?
Quand vous êtes en fluorescence vous ne voyez que votre signal. Si vous voulez montrer que la distribution de votre protéine est bien nucléaire, ou est uniquement cytoplasmique, il faut que vous puissiez localiser votre noyau. En fait ce que vous souhaitez c'est mettre en évidence deux compartiments, un nucléaire et un cytoplasmique.
C'est pour cela que l'on ajoute par exemple du dapi qui va faire fluorer l'ADN en bleu.
Si votre immunocyto se superpose au bleu du noyau c'est que votre protéine est strictement nucléaire. Si au contraire elle donne l'image en négatif c'est que votre protéine est cytoplasmique.

Cordialement,
piwi

[invite53e9773b]

oui mais si ma protéine est nucléaire mes anticorps fluorescent ne vont pas passer dans le noyau donc comment dois-je faire pour mettre en évidence cette protéine dans le noyau?

[piwi]

Pourquoi n'iraient ils pas dans le noyau?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite53e9773b]

je ne sais pas je pensais qu'ils ne pouvaient pas passer dans le noyau
merci pour votre aide

[invite53e9773b]

donc si j'ai bien compris pour mettre en évidence la présence d'une protéine nucléaire, on utilise des anticorps contre cette protéine et des intercalants de base et donc si on a un mélange des 2 cela vaut dire que la proétaine est présente dans le noyau?
merci

[piwi]

En immunocytologie on a une étape de perméabilisation au triton (X-100) qui permet justement de perforer les membranes afin que les anticorps puissent accéder à l'intérieur de la cellule et des organelles. Si vous ne faites pas cela vous avez raison, les anticorps ne pénètrent pas dans la cellule et encore moins dans le noyau.

Sinon vous avez compris. C'est la superposition des images de l'immuno et de la coloration nucléaire qui donne la localisation de la protéine.

Cordialement,
piwi