PCR maîtrise de la Tm

[invite72c9e288]

Bonjour à tous, voilà j'ai juste une petite question toute simple. Entre mon cours et le poly de ma prépa l'explication n'est pas la même à propos de la Température d'hybridation des amorces PCR.


Le cours dit que:

- Pour T<Tm l'amorce peut s'hybrider mais celà favorise le mésappariement.

- Pour T=Tm l'amorce s'apparie comme il faut.

- Pour T>Tm l'amorce ne s'hybride pas.

Dans mon poly ils disent l'inverse. Je pense que le prof a raison, mais j'ai cherché sur internet et j'ai rien trouvé de très concluant là dessus.

De plus il dit qu'il ya moins de 5°C de différence de Tm entre les 2 amorces. C'est pas plutôt 5°C de différence entre la température de fusion de l'amorce et celle de l'ADN à amplifier??

Voilà, à vrai dire étant en PCEM1, je vais surement apprendre ce que le prof a dit même si il s'est trompé...

Merci de vos réponses
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[Yoyo]

salut

en effet c'est ton prof qui a raison.
Il voulait certainement dire qu'il faut qu'il y ait moins de 5°C d'écart entre les Tm de tes deux amorces de PCR.

YOyo

[invite0e9887ab]

Bonjour,

Le cours dit que:

- Pour T<Tm l'amorce peut s'hybrider mais celà favorise le mésappariement.

- Pour T=Tm l'amorce s'apparie comme il faut.

- Pour T>Tm l'amorce ne s'hybride pas.

Pour moi, cette version est tout à fait correcte.

De plus il dit qu'il ya moins de 5°C de différence de Tm entre les 2 amorces.

Oui, 5°C, c'est bien possible.

Il faut en effet que les Tm de tes amorces soient les plus proches possible car tes amorces fonctionnent ensemble, en même temps... et donc durant les mêmes cycles de température.

Si la température d'hybridation est appropriée pour une amorce mais pas pour l'autre, tu n'auras pas d'amplification du fragment voulu.

C'est pas plutôt 5°C de différence entre la température de fusion de l'amorce et celle de l'ADN à amplifier??

Température de fusion de l'amorce ? Hum...


J'espère que tu vas t'en sortir

[invite0e9887ab]

Au fait, c'est quoi un "poly" ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite72c9e288]

Merci pour vos réponses, rapides en plus !

Ben ? un poly= polycopié (avec le cours du prof + les explications du tuteurs )


Sinon pour "la température de fusion de l'amorce" c'est ce que notre tuteur de chimie a écrit, il doit vouloir dire par là, la Tm de l'amorce qui doit être à 5°C près de la T° de l'ADN à amplifier.

J'espère aussi y arriver dès cette année histoire de pas avoir à reperdre encore 9 mois de ma vie à bosser tout le temps l'an prochain... On verra ca en juin