Le titre semble bien vague, en fait, j'ai plusieurs questions concernant la composition des tampons utilisés en ELISA.
1ere question :
Les solutions d'anticorps sont généralement préparées/diluées dans un tampon véronal (pH=7,4). Autant, je comprends la valeur du pH utilisé (valeur physiologique du pH sanguin, où les anticorps sont sensés être fonctionnels), mais je voudrais connaitre l'utilité du véronal. Quel avantage apporte-t-il au regard d'autres molécules chimiques (vis à vis d'un tampon carbonate par ex) ?
2e question :
Après l'étape de saturation du puits, on ajoute l'anticorps secondaire portant un marqueur de révélation. On ajoute également du Tween 20 et de la BSA dans le tampon véronal où celui ci est dilué.
Le Tween 20 est un détergent qu'on utilise généralement pour limiter les fixations non spécifiques. Seulement voila, dans une série de manip', j'ai dilué mon anticorps secondaire dans du "tampon véronal pur" (càd sans BSA, ni tween). A ma grande surprise, je n'ai eu AUCUN signal dans tous les cas (donc, aucune fixation de mon anticorps secondaire ? Pourquoi ?).
Je vous remercie de m'avoir lu et d'avance merci pour vos réponses.
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