the Genome walking method
bjr , j'ai besoin d'aide concernant the Genome walking method. particulièrement interessée par protocol for the GenomeWalker kit by Clontech.
merci
Etant sur un forum francophone, évitez de mélanger anglais et français dans vos messages. Faites au moins un effort de traduction si les informations que vous trouvez sont en anglais.
LXR
Dernière modification par LXR ; 07/06/2009 à 17h11.
Bonjour,
la marche sur le chromosome est une technique permettant le séquençage des régions amont et aval d'une séquence connue d'ADN.
1) Purification de l'ADN génomique
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2) Digestion de l'ADNg par une enzyme de restriction
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3) Ligature en condition dilluée à 4°C pour favoriser l'auto-circularisation des fragment d'ADN (même site de restriction).
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4) Les ligatures servent ensuite de matrice à des PCR, les amorces utilisées seront divergentes pour amplifier l'ADN circulaire.
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5) L'amplicon purifié est soumis au séquençage (proprement dit) avec l'amorce adéquate afin de séquencer le coté inconnue.
Voila, en espérant que c'est clair!
Salut,
En fait le genome walking avec le kit clontech est un peu différent.
La première étapes consiste a construire une banque de fragment tagé (restriction et ligation du tag). Et après y a une PCR et une nested a faire, avec une amorce spécifique de ta séquence connu et une amorce spécifique du tag.
Mais en fait en quoi a tu besoin d'aide? J'ai deja utilisé le kit donc je suis disponible si tu as des question.
Bonne journée
