Dilution de protéine dans de l'eau distillée

[invite121cd9e6]

Bonjours à tous.

Je travail sur un projet de purification de protéine dans le but de les tester comme Ag par immunoblot. Je voulais tester plusieurs concentrations de protéines donc je les ai diluées dans de l'eau distillé puis je comptait les déposer sur des membrannes de PVDF. Je n'ai pas assez réfléchis et maintenant que j'y pense, aurais-je mieux fait de les diluer dans du tampon style PBS? Et si oui, est ce que cela va me poser problème et est ce que je peux qd même utiliser mes dilutions?

Merci
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[invite1195cf56]

Bonsoir,

Cela dépend énormément de la nature de ta protéine. On utilise un milieu tamponné pour conserver sa structure tridimensionnel. Comme tu veux l'utiliser comme un antigène, tu as tout intérêt à conserver sa conformation spatiale et par là à la tamponner au moins à pH physiologique. Je pense néanmoins que le PBS est beaucoup mieux que de l'eau désionisée.

Bon je suis pas bien sûr de ma réponse donc faudrait attendre l'avis d'autres personnes.

Tekken

[invite30f4ebe2]

slt
dans votre cas vous allez étudié des interactyions proteines-ligands (ac-ag) ce sont des interractions de faibles énergies le plus souvent (ces des complexes non covalent métastable ) il va avoir aussi une phase de désorbtion ionisation qui requiert des conditions appropriées donc une simple variation de ph avoir son influence
donc il faut qu'il y est une force ionique adéquate un ph optimal pour ne pas détruire ces liaisons tres vulnérables qui permettent la survie de ces complexes
donc je partage l'avis de l'ami tekken en vs conseillant le diluant adéquat .cordialement .

[dipediou]

si ta proteine est deja en solution, dilus la simplement dans son solvant
un exemple:
mon collagene est conservé dans de l'acide a pH=3, donc pour ma dilution j'utilise le meme acide

si elle est en poudre, il te faudra trouver le tampon adequate, une possibilité est le tampon Tris communement utilisé en biologie pour des milieux mimant le physiologique, sinon tu as aussi NaHCO3 communement utilisé en culture cell' ou le PBS...
t'as l'embara du choix

[A voir en vidéo sur Futura]