RNase A

[invite4ee63644]

Bonjour, quelqu'un peut-il me donner un protocole détaillé pour faire un traitement de 40µl d'ADN génomique dans du tampon d'élution avec de la RNase A à 10mg/ml (fermentas)? SVP !

Merci beaucoup!
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[Flyingbike]

il n'y a pas de protocole tout fait, mais selon la quantité a traiter, il faut entre 10 et 100µg/mL de RNase A pendant 1h @ 37°. Je pense que la RNase n'est pas sensible à l'EDTA.

Si tu rajoutes par exemple 1µL de RNase A par tube ça devrait le faire...

[invite4ee63644]

il n'y a pas de protocole tout fait, mais selon la quantité a traiter, il faut entre 10 et 100µg/mL de RNase A pendant 1h @ 37°. Je pense que la RNase n'est pas sensible à l'EDTA.

Si tu rajoutes par exemple 1µL de RNase A par tube ça devrait le faire...

Merci! C'est à peu près ce que je pensais faire... Mais ensuite? Dois je refaire un chloroforme et une précipitation de mon ADN pour éliminer la RNase? Juste une précipitation?

[Flyingbike]

je dirais que ça dépend de ce que tu comptes faire avec ton ADN ensuite... Précipitation ou phénol/chlo ou meme juste inactivation (je sais pas si c'est possible avec la RNase)

[A voir en vidéo sur Futura]

[Yoyo]

Salut

La RNAse A ne s'inactive pas. Le seule moyen de s'en débarasser est un phenol/chloroforme, puis une précipitation.

YOyo