incubation de bactérie

[invitef479c613]

bonsoir...
demain j'ai un compt rendu sur l'incubation des bactéries ..
quelqu'un pourrait m'aider pour mieu comprandre ...en parlant sur les conditions de l'incubation par exemple.....!!
svp ...svp...et merci pour me repondre
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[Yoyo]

salut

Bon deja l'orthographe est pas génial, mais en plus "l'incubation des bactéries" ca ne veux rien dire. Alors prends le temps de nous expliquer précisément de quoi il retourne si tu veux de l'aide, on n'est pas censé deviner pour toi!

Yoyo

[invitef479c613]

salut......voilà: on a etudier l'ensemencement en masse *en milieu liquide*
on prend 3tubes à essai, chaque tube contient 5ml de BCPL(milieu de culture liquide *violet*) , puis on verse 1ml de dilution de 10^-3 de lait de vache (moins concentré que la dilution mère; 1ml de lait + 9ml d'eau physiologique.) dans les 3 tubes.. puis on les incube dans une étuve à 44°c pendant 48h...
...ma question est; pourquoi on a utiliser 3 tubes lors de l'ensemencement, tandis qu'on a besoin juste à 1seul tube pour voir la multiplication ???...est ça à une relation avec le dénombrement des colonies...!!!!

[invite75e918c6]

C'est comme avec la recherche de spores de clostridium dans les eaux de rivières, tu as tellement peu de bactéries pour une grande quantité de volume que quand tu prélève de la solution diluée, t'es pas sur d'avoir des bactéries étant donné que c'est un lait de vache qui doit être pasteurisé, donc pour avoir plus de chance de tomber sur un prélèvement de bactérie plutot que de solution complètement stérile

Pour la numération, sa doit être le même principe que le dénombrement des coliformes totaux, tu utilise 2 voire 3 tubes par dilution et tu obtien un chiffre où tu vas te référencer à un "abaque" pour avoir le Nombre le Plus Probable (NPP)

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitef479c613]

ok bien..., pour plus d'information, le lait de vache qu'on a utiliser est fraich et n'est pas stérilé,malgris qu'il contient des bactéries non pathogénes qui on est en train d'étudier ..
donc, tous simplement pour avoir bcp de chances d'avoir un bon nombre des bactéries multiplées..........merci en tous les cas

[sacharybalka]

Salut Liona!
En fait je pense que vous avez fait l'experience en triple pour donner une signification statistique au denombrement. En comparant les trois resultats, vous pouvez faire une moyenne (s'ils sont assez proches, sinon c'est qu'il y a eu un souci) et être ainsi plus près de la realité.

[invite75e918c6]

Etant donné que c'est un milieu liquide, sa n'a pas trop d'interet de faire une moyenne sur des positifs ou des négatifs.... donc je ne vois pas comment veut tu dénombrer sur un milieu liquide si ce n'est de dire que tu as au moins 1 UFC lorsqu'il y a un trouble (ou sinon faire le NPP comme avec les coliformes... mais c'est un dénombrement assez bizarre...)

[invitef479c613]

Salut Liona!
En fait je pense que vous avez fait l'experience en triple pour donner une signification statistique au denombrement. En comparant les trois resultats, vous pouvez faire une moyenne (s'ils sont assez proches, sinon c'est qu'il y a eu un souci) et être ainsi plus près de la realité.

saluten fait l'utilisation de 3 tubes tient compte dans le dénombrement...suivez moi ,,,,c'est comme ça ;
tube1 tube2 tube3 / tube1 tube2 tube3 / tube1 tube2 tube3
+ - + / + + + / - - +
____________ / ____________ / _____________
2 3 1


le - signifie que le resultat est négatif = couleur de BCPL reste toujour violet
le + signifie que le resultat est positif = couleur sera jaune
donc; le dénombrement est égale à 231 puis on va comparer ce chifre (231) dans un tableau appellé Mac grady

ma question est .....le dénombrement se fait apartir de tous les tubes (on compt aussi les tubes de mes camarades)??comme je l'ai montrer en haut ......ou bien juste mes 3 tubes ??..si on compte uniquement le resultat de mes 3 tubes ..on obtient par exepmle le chifre 2 .........alors comment on exprime cet resultat en multiplication des bactéries!!!!!!!!!!!!!!!!
c'est vraiment compliqué pour moi ....donc ..svp si quelqu'un a une idée ...n'hésiter pas...
merci à l'avance

[invite75e918c6]

... t'as combien de dilution où tu dois encemmencer 3 tubes BCPL?

[invitef479c613]

... t'as combien de dilution où tu dois encemmencer 3 tubes BCPL?

j'ai 6 dilutions ... 10^-1 et10^-2 et10^-3 et10^-4 et10^-5 et10^-6
la solution mère =1ml de lait +9ml d'eau physiologique
et je prend 1ml de dilution 10^-3 dans 15 ml de BCPL

[invitef479c613]

...le 1er dilution et plus consentré que le 2eme , et le 2eme est plus cpnsentré que le3eme ....etc
....je prend 3 tubes ..chaque tube contient 15ml de BCPL et 1ml de dilution 10^-3

[invite75e918c6]

bah voila !! c'est bien sa !! donc, c'est le meme système que le dénombrement des coliformes, avec la table de Mac Grady (je pense qu'elle s'applique pour sa) et tes résultats positifs ou non, tu prend le NPP (3 chiffres) le plus bas (il me semble) et ensuite pour avoir le nombre de bactéries/ ml, tu multiplie le NPP par la dilution la plus faible où tu prend ton NPP donc en gros sa fait

N bactéries = NPP*D(NPP)

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/macgrady.htm

[invitef479c613]

bah voila !! c'est bien sa !! donc, c'est le meme système que le dénombrement des coliformes, avec la table de Mac Grady (je pense qu'elle s'applique pour sa) et tes résultats positifs ou non, tu prend le NPP (3 chiffres) le plus bas (il me semble) et ensuite pour avoir le nombre de bactéries/ ml, tu multiplie le NPP par la dilution la plus faible où tu prend ton NPP donc en gros sa fait

N bactéries = NPP*D(NPP)

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/macgrady.htm

merci bcp ...pour votre aide
le dénombrement en milieu solide:
la charge microbienne=le nombre de colonies obtenu sur la boite de pétri * l'inverse de la dilution
le dénombrement en milieu liquide se fait comme je dis auparavant en utilisant le tableau de mac grady. car on peut pas compter les colonies dans le liquide
en tous les cas je vs remerçier

[invitef479c613]

salut ......
à l'occasion ..... J'ai lu les résultats de mon expérience....et donc ;;selon le but de TP (qui basé sur la présence des antirobactéries), mes resultat ont été négatifs ..= il n'ya pas des antirobactéries dans le lait de vache car il ya pas de changement de couleur en jaune ..la couleur reste toujour violet .....
...j'ai vu des troubles (de couleur blanc)dans mes 3 tubes ........ces troubles indiquent quoi ??? puisque il n'ya pas de croissance bactérienne ...!!!!
j'ai dit que dans mes tubes , il n'ya pas de croissance ...tandis que mes amies trouvent des nouveaux colonies dans leurs tubes .....alors on dit pas que le lait contient des antirobactéries car mes resultats ont prouvé que le lait ne contient pas des antirobactéries ......donc on dit qu'il ya une contamination (croissance des bactéries provenant de l'air) car dés le début on a laisser le lait de vache en contact avec l'air
et en consequence ....et selon mes resultats on peut dire que le lait de vache est de bon qualité microbiologique ....
merci de me repondre sur ma question en haut ....

[invite75e918c6]

Bon, ce n'est que mon point de vue....

Mais il me semble que le BCP c'est pour la recherche de coliforme et qu'il y a virement au jaune si le lactose est utilisé, cependant le trouble correspond bien à une croissance bactérienne qui ont utilisé une autre source de carbone pour proliféré.

Ensuite oui c'est surement la cause la plus probable d'avoir une contamination par voie aérienne du fait que le lait a y été exposé.

Par contre, je ne savais pas que c'était un moyen de rechercher des antirobactéries.... (sa existe comme nom sa déjà?)

[invitef479c613]

Bon, ce n'est que mon point de vue....

Mais il me semble que le BCP c'est pour la recherche de coliforme et qu'il y a virement au jaune si le lactose est utilisé, cependant le trouble correspond bien à une croissance bactérienne qui ont utilisé une autre source de carbone pour proliféré.

Ensuite oui c'est surement la cause la plus probable d'avoir une contamination par voie aérienne du fait que le lait a y été exposé.

Par contre, je ne savais pas que c'était un moyen de rechercher des antirobactéries.... (sa existe comme nom sa déjà?)

salut
oui ...si on autiliser le lactose ..on va obtenir des colonies de bactéries lactiques ....mais on a utiliser d'autre milieu de culture qui n'est pas favorable pour la prolifération des bactéries lactiques .......c'est normale .
pour le nom antirobactéries ....je sais pas moi ..mais il me semble que ce sont des bactéries pathogenes..!!!
....mercii à vous

[invite75e918c6]

Tu est sur que ce n'est pas "Enterobacterie"? où pas mal de souche sont pathogène comme E.Coli, Salmonelle, Shigelle, etc....?

[aulie]

Salut,

Si tu as incubé à 44°C c'est forcement pour dénombré les coliformes fécaux (ou thermotolérent) qui pousse à 44°C. (les autres bactéries du lait ne pousse pas à 44°C surtout les lactobacillus qui sont très sensible à la température)

Les coliformes fécaux sont des entérobactéries qui pousse à 44°C, utilise le lactose avec production de gaz, mais sans production d'indole. (S'il y a production d'indole, c'est un groupe plus particulier qui est l'espèce Escherichia coli.)

Ton milieu fonctionne comme ceci :

Indicateur coloré : pourpre de bromocrésol. En milieu acide : jaune, en milieu neutre : violet, en milieu basique : violet.

Lactose + : virage de l'indicateur coloré car la bactérie à utilisé le lactose est à rejeté des déchets acide.
Lactose - : trouble dans le milieu sans virage de l'indicateur coloré. (le milieu reste violet). La bactérie a utilisé les peptones disponible dans le milieu et a rejeté des déchets basiques.

Donc pour répondre à ta question tu es dans le cas du lactose -. La bactérie dans ton milieu c'est développé grâce au peptone et non grâce au lactose.

Mais le faites que tous les autres ont des résultats positif, que tu aies un trouble, et que la température soit de 44°C et que l'incubation a durée 48h, me fait peut être penser à un 3e cas.

Dans certain cas, la bactérie se developpe tellement que après avoir utiliser le lactose elle utilise se qu'il reste dans le milieu, ici les peptones.
Donc il y a d'abord des déchet acides, puis les peptones sont dégradé avec des déchets basique se qui fait re-virer ton indicateur de pH.

Si c'était mon compte rendu je concluerais sur cette hypothèse si je suis sur à 100% de ce que j'ai fais lors de ma manip. (Une erreur opérateur est très vite arrivé. Et le trouble que tu as vu est peut être simplement le lait) Et je donnerais les tests à faire pour confirmer mon hypothèse.

Quand tu fais une manip tu utilises que tes résultats pour interpréter.

Par contre, attention au termes que tu utilises. On ne comptes pas de colonie dans des milieux liquide. On observe un trouble qui signifie une présence de bactérie. Les colonies sont seulement sur les milieux solide.

[invitef479c613]

salut......et pour votre reponses
*pour Vilcrocrotte ; oui tu as le droit, c'est entérobactérie et elle défini comme ça:bactérie (de la famille des entérobactériacées) présente dans le tube digéstif de l’homme et des animaux et pouvant être pathogènes.
* pour aulie; oui, l'incubation se fait à44°c et pendant 48h ...., c'est quoi indole?? est un alcool ou quoi !!!
mon proffesseur me dit que le coliforme est une bactérie de l'intestin et qu'elle utilise le lactose ...qui se trouve dans le milieu BCPL ...mais que signifiée les 3 lettres B , C , P ..???......B je pense =billan
ensuite ...la couleur jaune indique la formation des acides ...!!!!
mon proffesseur me dit que les troubles que j'ai trouve dans les tubes, sont des voiles .....ou je sais pas moi ..je suis pas sur de ce nom ......peut tu dire mieu !!!!!
avant j'oblies ....l'ensemencement en masse ..on a utiliser le gilose tres chaud => mort de bactérie ...et c'est la faute de mon proffesseur ..car j'ai lui dit qu'on va les tuer si on mettre le gelose chaud .....mais ...elle m'ecoute pas ..
..........je vous en pris de m'aider ...........merci à l'avance

[aulie]

c'est quoi indole?? est un alcool ou quoi !!!

L'indole est un composé produit par certaine bactérie en utilisant le tryptophane (acide aminé)

...qui se trouve dans le milieu BCPL ...mais que signifiée les 3 lettres B , C , P ..???......B je pense =billan

BCP : Poupre de Bromo Crésol. C'est l'indicateur utilisé dans le milieu. Oui les lettres ne sont pas dans le bon sens

ensuite ...la couleur jaune indique la formation des acides ...!!!!

Oui c'est ça.
Dans tous les milieux que tu vas utiliser (ou presque) tu auras un indicateur de pH coloré qui te permettra de dire si la bactérie à utiliser le sucre présent dans le milieu ou non. Car en utilisant les sucres la bactérie produit de l'acide et le pH du milieu change. Dans l'utilisation du sucre sera mis en évidence par le virage de l'indicateur de pH.
ce lien => http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biot...ulture/BCP.htm est une fiche concernant le milieu BCP.

mon proffesseur me dit que les troubles que j'ai trouve dans les tubes, sont des voiles .....ou je sais pas moi ..je suis pas sur de ce nom ......peut tu dire mieu !!!!!

Je ne vois pas ce qu'elle entend par voile. Mais c'est peut être, comme je l'ai dit dans mon 1er poste, la couleur du lait.

avant j'oblies ....l'ensemencement en masse ..on a utiliser le gilose tres chaud => mort de bactérie ...et c'est la faute de mon proffesseur ..car j'ai lui dit qu'on va les tuer si on mettre le gelose chaud .....mais ...elle m'ecoute pas ..

IL y a chaud et chaud. Ta gélose tu es obligé de la couler chaude car sinon elle est prise en masse dans ton flacon, et tu peux plus rien faire.
Quand je prépare des milieux en général je coule mes boîtes à 45°C environ.
Je pense que si tu prends tes flacons de milieu dans une étude ou un bain marie tu peux regarder la température, et ça sera entre 40 et 50°C.
Donc oui c'est chaud, mais les bactéries n'en meurt pas.

[invitef479c613]

bonjour..^^...merci aulie ...votre reponse m'aide bouceaup
... bon journé