Transformation au CaCl2

[ozzypo]

Bonjour, j'ai deux petites questions a propos de deux étapes de la transformation cellulaire au CaCl2. 1- Quel est l'utilité du choc thermique après l'ajout du CaCl2? Moi je crois que cette étape sert a insérer le vecteur dans la cellule. 2- pourquoi préchauffer le milieu SOC avant étalement sur gélose? Quel sont les avantages et les composantes au milieux SOC? Merci

[Josquin]

Pour faire de la transfection, il faut faire entrer un gros truc dans une cellule, protégée par une membrane plasmique imperméable. Un choc thermique (ou électrique) induit un stress important qui fragilise la membrane, et facilite l'entrée de l'ADN. Ca tue pas mal de cellules, mais la transfection est un compromis qui permet au final de garder quand même des cellules vivantes ET qui ont recu de l'ADN.
Le milieu SOC, je sais plus ce que c'est, la réponse m'intéresse aussi !

Josquin

[LXR]

Correction : pour les bactéries, la méthode permettant l'entrée d'ADN dans la cellule procaryote s'appelle la transformation. La transfection est l'entrée d'ADN dans des cellules eucaryotes par méthode non-virale. Enfin la transduction est l'entrée d'ADN dans les cellules eucaryotes par méthode virale. (puisque un petit rappel des termes adéquat ne fait jamais de mal )

Greg

[Edelweiss68]

La transfection est l'entrée d'ADN dans des cellules eucaryotes par méthode non-virale.

Mais dans ce cas l'ADN transfecté n'est pas d'origine virale?

[LXR]

L'origine de l'ADN n'importe pas sur ces dénominations. Il s'agit uniquement des méthodes employées pour faire entrer l'ADN dans les cellules.

- Transfection : les méthodes utilisant des agents polycationiques (DEAE-Dextran, PEI (PolyEthylenImine), polylysine), des liposomes cationiques.

- Transduction : Lentivirus, Rétrovirus,.... Utilisation de la machinerie virale pour faire entrer l'ADN dans la cellule.

Bien entendu, selon la méthode employée, on sera plus probablement en présence d'un type d'ADN précis : en général plasmide pour la transfection, génome viral modifié pour la transduction.

Je ferme la parenthèse.

Si une personne connait le milieu SOC, qu'elle n'hésite pas!

Greg

[leftalone]

Bonjour, moi je cherche à comprendre ce qui se passe en ajoutant du CaCl2 à la culture, c'est à dire à ce qu'il fait qu'elle est compétente. J'ai lu qu'en fait ca formait des sphéroplastes dans le cas qui m'intéresse c'est à dire E.Coli. Si quelqu'un peu confirmer et m'expliquer quelle est l'action précise du cacl2.
merci d'avance