Bonjour,
Je suis en pleine extraction d'ARN a partir d'échantillon vegetaux.
Les rapports de DO 260/280 sont proches de 2 jusqu'a 2.16
Les rapports de DO 260/230 sont près de 2 voire jusqu'a 2.29.
(Quantifiés au nanodrop)
Je sais que ces rapports permettent de verifier la pureté de l'ARN, mais pourquoi des rapports supérieur à 2? que cela signifient-ils???
Merci pour votre aide!
Salut, je me posais la même question pour un rapport de lab et avec un ami on est venu à cette conclusion. Les acides nucléiques absorbent la lumière à une longueur d'onde de 260, à 280 se sont les protéines qui absorbe la lumière et à 230 se sont les molécules organiques. Donc, je crois, plus que tu a de contaminat plus que ton ratio est bas.
S.V.P. corrigez moi ou confirmez ma réponse
c'est ça. Ca permet de vérifier que tu n'as pas trop de saloperies dans ton échantillon.
en effet, c'est ça.
les acides nucléiques absorbent MAJORITAIREMENT à 260nm
les protéines absorbent MAJORITAIREMENT à 280nm (à cause des acides aminés aromatiques (Phe, Trp, Tyr)
les molécules organiques (tampons, etc...) absorbent MAJORITAIREMENT à 230nm.
C'est pourquoi un mauvais ratio 260/280 (généralement < 1.9) indique une contamination par protéines et un mauvais ratio 260/230 (généralement > 2) indique une contamination par molécules organiques.
Maintenant si ta question est "Pourquoi on peut pas avoir un rapport de 10'000 si on a pas du tout de contaminant ?", alors là, sauf erreur de ma part, et c'est pourquoi j'ai accentué le "MAJORITAIREMENT", c'est que les acides nucléiques absorbent aussi un petit peu à 230 ou 280, ce qui fait que la mesure de l'absorbtion à 230 ou 280 n'est jamais de 0.
Astro
Le spectre d'absorption fait une jolie courbe de Gauss. En fait comme le dit astrobax, le maximum d'absorption est à 260 nm, mais ça veut pas dire qu'il n'y a aucune absorption à 265 ou 280 (ou 240nm). C'est exactement pour ça que le rapport est de 2 en théorie.
C'est pour cette même raison qu'on mesure à 280 d'ailleurs : parce que le pic d'absorption des protéines est à 280, mais qu'elles absorbent aussi à 260
vous avez deja eu toute les reponses,
mais si vous voulais plus de details sur l'analyse de la qualité des ARN par nanodrop , je vous renvois sur le site
http://www.biomedicalgenomics.org/RN...y_control.html,
c'est le meilleur que j'ai pu trouvé après de longue recherche
